磁敏性羥基微球的構(gòu)建及在固定青霉素酰化酶中的應(yīng)用.pdf

1、　　固定化酶可以提高酶的穩(wěn)定性并增加酶的使用次數(shù)，以及易與產(chǎn)物和底物分離等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛深入的研究。但目前常用的固定化方法在制備固定化酶時(shí)酶活損失較大，限制了固定化酶的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。本文針對(duì)目前固定化酶方法的不足之處提出了相應(yīng)解決方法，并通過(guò)對(duì)用于固定酶的磁敏性載體及固定化過(guò)程進(jìn)行了深入細(xì)致研究，取得有益的成果。　　本文采用懸浮聚合法合成了一系列以磁性Fe3O4為核心的甲基丙烯酸羥乙酯-苯乙烯共聚球狀磁性微球，經(jīng)環(huán)氧氯丙烷活化，制備活化度

2、達(dá)到1600μmol/g，粒徑為120～200μm的微球。通過(guò)對(duì)不同交聯(lián)度的活化微球進(jìn)行固定化青霉素酰化酶實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)交聯(lián)度30﹪的微球固定化酶效果最優(yōu)，并進(jìn)一步對(duì)固定化青霉素?；傅臈l件進(jìn)行了研究，得到了較好的固定化參數(shù)：給酶量為2000U/g(干載體)，反應(yīng)時(shí)間為24h，反應(yīng)溫度35℃，pH為8.0。在此條件下進(jìn)行酶固定化，固定化酶活性為782.2U/g(干載體)，固定化效率88.72﹪，活性回收率為33.63﹪；水解青霉素G鉀鹽的最

3、適溫度為45℃，最適PH為8.5；固定化酶的儲(chǔ)存和操作穩(wěn)定性良好。除此之外，測(cè)定了酶促反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)常數(shù)：溶液酶和固定化酶的米氏常數(shù)，分別為1.188×10-5mol/L和5.879×i0-4mol/L，苯乙酸的競(jìng)爭(zhēng)性抑制常數(shù)為2.685×10-4mol/L。應(yīng)用苯乙酸作為酶定向化固定試劑，使酶固定化過(guò)程中活性回收比同等條件下不加苯乙酸的提高8.35﹪。　　通過(guò)研究，最終獲得了一種磁敏性、高性能的青霉素?；篙d體和應(yīng)用酶競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑作為