針刺內關穴調節(jié)延髓NO-NOS系統(tǒng)及其有關神經(jīng)遞質改善大鼠心肌缺血作用機制探討.pdf

1、目的:觀察急性心肌缺血(AMI)大鼠模型心功能、心肌梗死面積的變化及針刺內關穴(Pe6)對急性心肌缺血的改善作用。通過檢測急性心肌缺血和針刺組大鼠心血管調節(jié)中樞延髓頭端腹外側區(qū)(RVLM)一氧化氮/一氧化氮合酶(NO/NOS)含量及分布變化,以及該部位相關氨基酸遞質改變,探討針刺與中樞NO/NOS及其氨基酸遞質在RVLM對AMI大鼠血壓和心功能的調節(jié)作用。進而探究針刺改善AMI的中樞機制和意義。
　　 方法:通過冠狀動脈左前降支

2、結扎手術制備AMI大鼠模型;采用針刺大鼠雙側內關穴位觀察針刺改善心肌缺血作用,同時監(jiān)測心率(HR),平均動脈壓(MAP),心室內壓(IVP);采用氯化四唑(TTC)染色檢測梗死心肌面積以及蘇木精和伊紅(眥)染色觀察梗死心肌組織形態(tài):采用放射免疫法(RIA)測定急性心肌缺血大鼠血漿去甲腎上腺素(NE)和腦鈉肽(BNP)的含量:采用熒光定量聚合酶鏈式反應(Realtime-PCR)、免疫組織化學(IHC)等方法,觀察AMI大鼠RVLM神經(jīng)元

3、型一氧化氮合酶(nNOS)和誘導型一氧化氮合酶(iNOS)的表達變化;應用中樞核團微量注射方法觀察NO及NOS抑制劑在RVLM對針刺作用的影響以及NO/NOS在對AMI大鼠血壓和心功能的調節(jié)作用;采用微透析結合高效液相色譜一熒光檢測研究參與上述過程的氨基酸遞質的改變。
　　 結果:(1)冠狀動脈左前降支結扎后,大鼠立即出現(xiàn)心電圖S-T段抬高,結扎線遠端心肌發(fā)白,運動減弱,說明AMI模型制各成功。冠脈結扎術后5天,TTC及HE染色

4、顯示AMI后壞死的心肌組織,心梗組大鼠外周血液中腦鈉肽(BNP),去甲腎上腺素(NE)水平較假手術組升高;(2)針刺AMI大鼠內關穴20min,連續(xù)5天,可以降低AMI大鼠心肌梗死面積及血液中BNP和NE的水平;(3)針刺組大鼠HR,MAP下降,其它各項心功能指標均有明顯改善,包括LVSP,-dp/dt,.+dp/dt和LVEDP下降;(4)若電針前于RVLM微量注射NOS非選擇性抑制劑左旋硝基精氨酸甲基酯(L-NAME15nmol/1

5、00nl),或者iNOS抑制劑氨基胍(AG,250pmol/100nl)或者nNNOS抑制劑7-硝基吲唑(7-NI,5pmol/100nl),除HR和MAP外,電針改善AMI心功能的作用被取消或減弱;(5)Realtime-PCR結果表明:正常wistar大鼠iNOS與nNOS在RVLM均有表達。與對照組假手術相比,AMI大鼠RVLM區(qū)nNOSmRNA表達明顯增加而iNOSmRNA的表達減少;(6)IHC結果顯示,在延髓,nNOS和iN

6、OS陽性神經(jīng)元主要分布在RVLM、中縫核、巨細胞旁外側核背側部。舌下神經(jīng)核和下橄欖核等處也有陽性細胞分布。AMI大鼠RVLM的nNOS陽性細胞明顯多于對照大鼠,而iNOS陽性細胞數(shù)明顯降低,針刺治療可以降低AMI大鼠nNOS陽性細胞數(shù),升高其iNOS陽性細胞數(shù);(7)在正常和AMI大鼠,微量注射NO供體L-精氨酸(L-arginine50nmol,100nmol/100n1)至RVLM能夠在上述2組大鼠產(chǎn)生明顯的MAP和HR降低,MAP

7、呈現(xiàn)劑量依賴性降低并且在AMI大鼠更明顯。RVLM注射NOS非選擇性抑制劑L-NAME(15nmol/100nl)能夠升高血壓加快心率。RVLM注射AG(250pmol/100nl)能夠產(chǎn)生與L-NAME類似效應,血壓升高,心率明顯加快。與此相反,7-NI(5pmol/100nl)能夠降低血壓和心率(8)在引起血壓心率變化的同時,在RVLM注射AG后第一,二個10minRVLM透析液中抑制性氨基酸(IAA)γ-氨基丁酸(GABA),?；?/p>

8、酸(Tau)釋放減少而興奮性氨基酸(EAA)天門冬氨酸(Asp)釋放增加:在RVLM注射7-NI后第一,二個10min可見RVLM透析液中EAA谷氨酸(Glu)釋放減少IAA甘氨酸(Gly)和?；撬?Tau)釋放增多;(9)AMI大鼠RVLM透析液中EAA:Glu,Asp釋放增多而IAA:GABA和Tau釋放減少。針刺可以減少Glu,而增加GABA和Tau的釋放。
　　 結論:(1)采用結扎大鼠左冠狀動脈前降支(LAD)的方法,

9、能成功造成AMI大鼠模型,該模型大鼠外周交感活性增高伴隨心功能各項指標減弱。(2)針刺AMI組大鼠內關穴,可以降低交感活性,改善大鼠血流動力學指標,改善心功能。NOS抑制劑能夠部分取消針刺改善心功能的效應,說明這種效應可能與NO介導有關。(3)針刺內關穴可以調節(jié)nNOS和iNOS在RVLM內表達量,同時可以減少AMI大鼠RVLM區(qū)EAA遞質GLU釋放,而增加IAAGABA和Tau釋放,這可能與針刺降低AMI大鼠中樞交感活性有關。(4)N

10、O在RVLM能降低正常大鼠及AMI大鼠升高的血壓和心率,在AMI大鼠上效果更明顯。(5)nNOS來源的N0在RVLM能促進興奮性GLU釋放,而抑制性Gly,Tau釋放減少而發(fā)揮其升壓和加快心率的效應,而iNOS來源的NO在RVLM主要通過增加IAA遞質GABA,Tau和減少EAAAsp發(fā)揮其降壓和減慢心率的作用。(6)針刺改善大鼠AMI作用的中樞機制之一可能是在RVLM通過增加iNOS和減少nNOS的表達而影響NO的生成,從而調節(jié)興奮性