父本基因組在小鼠卵母細(xì)胞中的主動(dòng)去甲基化研究.pdf

1、受精后小鼠卵子中父本基因組的主動(dòng)去甲基化對(duì)于植入前的胚胎發(fā)育是非常重要的。然而植入前胚胎主動(dòng)去甲基化的機(jī)制仍不甚明了，DNA去甲基化酶是否確實(shí)存在于MⅡ卵母細(xì)胞胞質(zhì)中還是源自母本基因組也未有確切結(jié)論。 為判定MⅡ卵的胞質(zhì)還是母本基因組對(duì)于父本基因組的主動(dòng)去甲基化起作用，我們將凍融的精子頭注射到正?；蛉ズ说腗Ⅱ卵中，然后研究了其中父本基因組的甲基化狀態(tài)。我們通過(guò)5-甲基胞嘧啶免疫染色的方法比較了單倍體和二倍體孤雄胚胎(通過(guò)注射一個(gè)

2、或兩個(gè)精子頭到去核的MⅡ卵)、ICSI(introcytoplasmicsperminjection)胚胎、三倍體胚胎(注射兩個(gè)精子頭到完整MⅡ卵)以及原核移植生產(chǎn)的重構(gòu)孤雄胚胎。結(jié)果顯示所有實(shí)驗(yàn)組的胚胎都能發(fā)生父本基因組的主動(dòng)去甲基化。 我們還使用bisulfite測(cè)序的方法檢測(cè)了原核期和囊胚期持家基因和印跡基因CpG位點(diǎn)的甲基化變化，來(lái)比較植入前孤雄胚胎發(fā)育中兩種基因的甲基化模式。我們收集了雙精注射和原核移植生產(chǎn)的二倍體孤雄

3、胚胎受精后8h的原核和隨后發(fā)育而成的囊胚，對(duì)于持家基因α-actin以及印跡基因H19和Igf2之間的ICR(imprintingcontrolregion)的甲基化水平進(jìn)行了分析。通過(guò)bisulfite處理后測(cè)序，結(jié)果顯示精子中處于完全甲基化狀態(tài)的α-actin基因在受精后所有CpG位點(diǎn)都完全去甲基化了，并且可能維持這種狀態(tài)至囊胚期。相反，ICR在孤雄胚胎原核期和囊胚期的甲基化水平都只是稍有降低。我們的結(jié)果說(shuō)明了父本基因組中的持家基因