重組銅綠假單胞桿菌延長因子Tu與脂蛋白(a)的相互作用.pdf

1、分類號S855學(xué)校代碼10129UDC579學(xué)號2012216023重組銅綠假單胞桿菌延長因子Tu與脂蛋白(a)的相互作用TheInteractionBetweenPlasmaLipoprotein(a)RecombinantElongationFactTuDerivedFromPseudomonasaeruginosa申請人：劉娜學(xué)生類別：學(xué)術(shù)型碩士學(xué)科門類：農(nóng)學(xué)學(xué)科專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向：獸醫(yī)微生物學(xué)與免疫學(xué)指導(dǎo)教師：韓潤林教授論

2、文提交日期：二〇一六年六月摘要銅綠假單胞桿菌（Pseudomonasaeruginosa，P.aeruginosa）表面的翻譯延長因子Tu（ElongationfactTu，Tu）可與人纖溶酶原（Plasminogen，Plg）特異性結(jié)合，這種結(jié)合態(tài)的Plg被激活后可降解宿主胞外基質(zhì)，有利于致病菌穿越組織屏障。本實(shí)驗(yàn)室提出，由于脂蛋白(a)[Lipoprotein(a)，Lp(a)]中的apo(a)與Plg具有高度同源性，可以抑制病菌與

3、Plg的結(jié)合，因此可能具有潛在的抗感染作用。為驗(yàn)證Lp(a)是否可與銅綠假單胞桿菌表面Tu特異性結(jié)合，進(jìn)而競爭性抑制Plg與Tu的結(jié)合，本文進(jìn)行了如下研究：（1）在大腸桿菌中表達(dá)并純化了重組Tu（RecombinantTu，rTu）蛋白及重組TA蛋白（RecombinantTuK394A，rTA），通過ELISA實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：①rTu、rTA蛋白與Plg、Lp(a)結(jié)合，與低密度脂蛋白（Lowdensitylipoprotein，LDL）不

4、結(jié)合，表明rTu與Lp(a)的結(jié)合可能與apo(a)有關(guān)。②賴氨酸類似分子6氨基己酸（εaminocaproicacid，EACA）對rTu蛋白與Plg、Lp(a)的結(jié)合有一定的抑制作用，表明rTu蛋白可能是與Plg、Lp上的賴氨酸結(jié)合位點(diǎn)（Lysinebindingsites，LBS）有關(guān)。③較高濃度的Lp(a)能抑制Plg與rTu的結(jié)合，表明Plg及Lp(a)與rTu的結(jié)合位點(diǎn)有相同之處。（2）ELISA實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：①Plg、Lp(a

5、)和LDL都可以與銅綠假單胞桿菌結(jié)合，且不同生長時期菌的結(jié)合值無顯著差異。②EACA對銅綠假單胞桿菌與Plg、Lp(a)的結(jié)合有一定的抑制作用，表明其結(jié)合與Plg、Lp上的上的LBS有關(guān)。（3）制備并純化得到鼠抗rTu多克隆抗體（MouseantirTuIgG，rTu抗體）。通過ELISA實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：①rTu抗體能抑制rTu與Lp(a)的結(jié)合。②不同生長時期銅綠假單胞桿菌表面Tu表達(dá)量有差異，但因該菌表面還有其他Lp(a)結(jié)合蛋白，因而不