血漿脂蛋白與病原細菌相互作用研究(Ⅰ).pdf

1、運輸脂類物質(zhì)是血漿脂蛋白的基本作用。越來越多的報道顯示血漿脂蛋白與微生物感染之間有重要的相互聯(lián)系，血漿脂蛋白往往對微生物感染起到部分防御的作用。有大量證據(jù)說明高密度脂蛋白（high—density lipoprotein，HDL）是天然免疫的一部分，具有直接保護宿主，抗感染和炎癥的作用。本研究偶然發(fā)現(xiàn)重組表達的M41型A群鏈球菌[group A Streptococcus （GAS）]的Ⅰ型膠原樣蛋白（streptococcal col

2、lagen—like protein 1，Scll）能與HDL結(jié)合。Scll是GAS表面的一種毒力因子。一些M型的GAS表達的Scll可以與低密度脂蛋白（low—density lipoprotein，LDL）結(jié)合。為證實Scll與HDL的相互作用，本研究從M41血清型A群鏈球菌（GAS）的兩種菌株（MGAS6183、CMCC32198）中克隆了Scll基因，構(gòu)建了全長和不同截短的表達載體并在大腸桿菌BL21中表達和純化。通過親和色譜實

3、驗以及Western blot，Dot blot，ELISA實驗證實了兩種菌株來源的rScll都可以通過N末端的可變區(qū)（variable regions，V區(qū)，含84個氨基酸）結(jié)合HDL，而截去V區(qū)N末端42個氨基酸或C末端42個氨基酸的rScll，均不能與HDL結(jié)合，說明完整的V區(qū)結(jié)構(gòu)在rScll與HDL的結(jié)合中起重要作用。進一步研究發(fā)現(xiàn)Tween 20能抑制rScll與HDL的結(jié)合，提示rScll與HDL的結(jié)合可能是通過疏水相互作用

4、。由于rScll能同時結(jié)合HDL和LDL，因此，在制備無脂血清方面可能有潛在的用途。據(jù)我們所知，這是在國際上首次發(fā)現(xiàn)GAS M41的rScll與HDL結(jié)合，但是這種HDL與GAS的相互作用在GAS致病性或機體抗感染中的作用還有待于深入的研究。目前，脂蛋白（a）[Lipoprotein （a），Lp（a）]的生理功能仍然不清，但是Lp （a）的組成成分一載脂蛋白（a）[Apo （a）]，與纖溶酶原（Plasminogen，Plg）有高度的

5、相似性，因此可以假設(shè)Lp （a）很可能與細菌表面的Plg受體結(jié)合，從而抑制Plg與細菌的結(jié)合，最終抑制細菌對Plg的激活作用，阻礙細菌生長和穿越人體組織屏障，在一定程度上起到抵抗細菌感染的作用。為驗證這一假設(shè)，本研究用柱層析技術(shù)從血漿中分離制備Lp （a），并用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測Lp （a）與金黃色葡萄球菌是否結(jié)合。結(jié)果初步證明Lp （a）可與金黃色葡萄球菌的菌株CMCC26003結(jié)合，而且一定濃度的賴氨酸類似物6—氨基

6、己酸（20mM）可以抑制金黃色葡萄球菌與Lp （a）結(jié)合，提示血漿Lp （a）有可能通過其Kringle結(jié)構(gòu)域上的賴氨酸結(jié)合位點與金黃色葡萄球菌結(jié)合。將金黃色葡萄球菌與Plg以及Lp （a）共孵育，再加入尿激酶（uPA），結(jié)果顯示由于Lp （a）的加入，菌表面的纖溶酶活性降低，說明Lp （a）可抑制金黃色葡萄球菌對Plg的吸附?？傊狙芯吭趪H上首次發(fā)現(xiàn)Lp （a）有可能與金黃色葡萄球菌結(jié)合并抑制金黃色葡萄球菌對Plg的吸附，這一發(fā)現(xiàn)