血漿脂蛋白與病原細(xì)菌相互作用研究(Ⅰ).pdf

1、運(yùn)輸脂類物質(zhì)是血漿脂蛋白的基本作用。越來(lái)越多的報(bào)道顯示血漿脂蛋白與微生物感染之間有重要的相互聯(lián)系，血漿脂蛋白往往對(duì)微生物感染起到部分防御的作用。有大量證據(jù)說(shuō)明高密度脂蛋白（high—density lipoprotein，HDL）是天然免疫的一部分，具有直接保護(hù)宿主，抗感染和炎癥的作用。本研究偶然發(fā)現(xiàn)重組表達(dá)的M41型A群鏈球菌[group A Streptococcus （GAS）]的Ⅰ型膠原樣蛋白（streptococcal col

2、lagen—like protein 1，Scll）能與HDL結(jié)合。Scll是GAS表面的一種毒力因子。一些M型的GAS表達(dá)的Scll可以與低密度脂蛋白（low—density lipoprotein，LDL）結(jié)合。為證實(shí)Scll與HDL的相互作用，本研究從M41血清型A群鏈球菌（GAS）的兩種菌株（MGAS6183、CMCC32198）中克隆了Scll基因，構(gòu)建了全長(zhǎng)和不同截短的表達(dá)載體并在大腸桿菌BL21中表達(dá)和純化。通過(guò)親和色譜實(shí)

3、驗(yàn)以及Western blot，Dot blot，ELISA實(shí)驗(yàn)證實(shí)了兩種菌株來(lái)源的rScll都可以通過(guò)N末端的可變區(qū)（variable regions，V區(qū)，含84個(gè)氨基酸）結(jié)合HDL，而截去V區(qū)N末端42個(gè)氨基酸或C末端42個(gè)氨基酸的rScll，均不能與HDL結(jié)合，說(shuō)明完整的V區(qū)結(jié)構(gòu)在rScll與HDL的結(jié)合中起重要作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Tween 20能抑制rScll與HDL的結(jié)合，提示rScll與HDL的結(jié)合可能是通過(guò)疏水相互作用

4、。由于rScll能同時(shí)結(jié)合HDL和LDL，因此，在制備無(wú)脂血清方面可能有潛在的用途。據(jù)我們所知，這是在國(guó)際上首次發(fā)現(xiàn)GAS M41的rScll與HDL結(jié)合，但是這種HDL與GAS的相互作用在GAS致病性或機(jī)體抗感染中的作用還有待于深入的研究。目前，脂蛋白（a）[Lipoprotein （a），Lp（a）]的生理功能仍然不清，但是Lp （a）的組成成分一載脂蛋白（a）[Apo （a）]，與纖溶酶原（Plasminogen，Plg）有高度的

5、相似性，因此可以假設(shè)Lp （a）很可能與細(xì)菌表面的Plg受體結(jié)合，從而抑制Plg與細(xì)菌的結(jié)合，最終抑制細(xì)菌對(duì)Plg的激活作用，阻礙細(xì)菌生長(zhǎng)和穿越人體組織屏障，在一定程度上起到抵抗細(xì)菌感染的作用。為驗(yàn)證這一假設(shè)，本研究用柱層析技術(shù)從血漿中分離制備Lp （a），并用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)Lp （a）與金黃色葡萄球菌是否結(jié)合。結(jié)果初步證明Lp （a）可與金黃色葡萄球菌的菌株CMCC26003結(jié)合，而且一定濃度的賴氨酸類似物6—氨基

6、己酸（20mM）可以抑制金黃色葡萄球菌與Lp （a）結(jié)合，提示血漿Lp （a）有可能通過(guò)其Kringle結(jié)構(gòu)域上的賴氨酸結(jié)合位點(diǎn)與金黃色葡萄球菌結(jié)合。將金黃色葡萄球菌與Plg以及Lp （a）共孵育，再加入尿激酶（uPA），結(jié)果顯示由于Lp （a）的加入，菌表面的纖溶酶活性降低，說(shuō)明Lp （a）可抑制金黃色葡萄球菌對(duì)Plg的吸附。總之，本研究在國(guó)際上首次發(fā)現(xiàn)Lp （a）有可能與金黃色葡萄球菌結(jié)合并抑制金黃色葡萄球菌對(duì)Plg的吸附，這一發(fā)現(xiàn)