不同海參多糖提取分離及化學(xué)組成分析比較.pdf

1、本文選取當(dāng)前市場(chǎng)銷售的品質(zhì)、價(jià)格不一的10種海參，提取分離其多糖，從化學(xué)組成、波譜分析以及酸解寡糖組分分析三個(gè)角度分析比較了10種海參多糖。建立并優(yōu)化了應(yīng)用柱前衍生高效液相色譜測(cè)定海產(chǎn)動(dòng)物多糖單糖組成的方法，同時(shí)測(cè)定糖醛酸、氨基糖和中性單糖。本方法快速、準(zhǔn)確，應(yīng)用性強(qiáng)，解決了當(dāng)前海產(chǎn)動(dòng)物中多糖、單糖組成測(cè)定繁瑣、易受干擾的問(wèn)題。 海參多糖提取采用酶解、乙醇沉淀和季胺鹽沉淀法；分子量測(cè)定采用高效凝膠過(guò)濾色譜法；化學(xué)組成分析分別采用

2、傳統(tǒng)化學(xué)法和柱前衍生高效液相色譜法，并進(jìn)行結(jié)果比較；硫酸基的取代位點(diǎn)采用紅外波譜和核磁共振波譜測(cè)定；水解寡糖采用稀硫酸水解法進(jìn)行，酸解寡糖化學(xué)分析采用薄層層析色譜和高效液相色譜進(jìn)行。 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，10種海參多糖在化學(xué)組成上差異明顯。多糖得率以中國(guó)產(chǎn)日本刺參為最高，達(dá)7.16％，以日本刺參為最低，僅為1.31％。所得10種海參多糖分子量集中在三大區(qū)域：大于70萬(wàn)，16-25萬(wàn)以及0.5-1.2萬(wàn)。Black teat多糖、北極海

3、參多糖、冰島刺參多糖、挪威紅參多糖以及日本刺參多糖主要組分的分子量為16-25萬(wàn)，其余5種海參多糖主要組分的分子量大于70萬(wàn)。10種海參多糖總糖、蛋白、硫酸基、糖醛酸和氨基糖含量的波動(dòng)范圍分別為40.33％-62.11％，0.44％-19.48％，19.54％-29.95％，9.85％-13.38％和4.92％-10.18％。中性單糖測(cè)定表明10種海參多糖均含有巖藻糖和半乳糖，部分含有甘露糖和葡萄糖，且?guī)r藻糖含量很高。10種海參多糖在陰

4、離子交換樹(shù)脂色譜柱上的洗脫曲線明顯不同，除仿刺參多糖和日本刺參多糖外，其余8種海參多糖均在鹽濃度為3.2 mol/L的洗脫條件下洗脫完全。 柱前衍生高效液相色譜法采用2 mol/L TFA，110℃，8h的水解條件，1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生，ZORBAX Eclipse XDB-C18分離柱分離，紫外檢測(cè)法對(duì)10種海參多糖進(jìn)行單糖組成分析。其對(duì)中性和堿性單糖組成的測(cè)定結(jié)果和傳統(tǒng)化學(xué)法測(cè)定結(jié)果基本一致，但對(duì)糖

5、醛酸的測(cè)定，傳統(tǒng)化學(xué)法測(cè)定結(jié)果明顯偏高，液相色譜法的測(cè)定結(jié)果較為準(zhǔn)確。將液相色譜法推廣至羊棲菜多糖、魷魚(yú)墨多糖、鯊魚(yú)軟骨多糖、鯊魚(yú)魚(yú)翅多糖以及褐藻膠等多種海產(chǎn)動(dòng)植物多糖單糖組成的測(cè)定，結(jié)果令人滿意。紅外波譜表明，10種海參多糖均含有羥基、羧基、乙酰胺基、硫酸基以及巖藻糖的甲基，且不同海參多糖硫酸基的取代位點(diǎn)不同。菲律賓刺參多糖、中國(guó)產(chǎn)日本刺參多糖、Sand Fish多糖、Black Teat多糖、北極海參多糖以及墨西哥刺參多糖的硫酸基取

6、代位點(diǎn)是巖藻糖的C-4位或氨基半乳糖的C-4位；冰島刺參多糖和美國(guó)肉參多糖的硫酸根取代位點(diǎn)可能在巖藻糖的C-4位或氨基半乳糖的C-2位或C-4位；而挪威紅參多糖和日本刺參多糖則可能在巖藻糖的C-2位、C-3位、C-4位或者是氨基半乳糖的C-4位或C-6位存在硫酸根取代情況。核磁共振波譜印證了紅外波譜的信息，同時(shí)給出雙硫酸根取代和未經(jīng)硫酸根取代巖藻糖的<'1>H化學(xué)位移信號(hào)。除Sand Fish多糖外，其他海參多糖均存在C-2、C-4位雙

7、硫取代巖藻糖，而C-3、C-4位雙硫取代巖藻糖只存在于菲律賓刺參多糖、SandFish多糖、Black teat多糖、北極海參多糖、冰島刺參多糖以及日本刺參多糖中。除挪威紅參多糖、美國(guó)肉參多糖和墨西哥刺參多糖之外，其余7種海參多糖均含有未經(jīng)硫酸化的巖藻糖。 酸解海參多糖的最佳條件為0.05mol/L H<,2>SO<,4>，80℃，水浴18h。所得10種海參寡糖經(jīng)薄層層析色譜分離得到4-7個(gè)寡糖組分，北極海參多糖、美國(guó)肉參多糖、