雞常染色體矮小性狀的候選基因研究.pdf

1、為了探尋導(dǎo)致雞常染色體矮小性狀的主效基因，本實(shí)驗(yàn)主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行了研究： 1.根據(jù)前人的初步定位結(jié)果結(jié)合比較基因組學(xué)手段，在雞的1號(hào)染色體上確定一段長(zhǎng)度為2.7Mb，包含52個(gè)基因的物種間同線性保守區(qū)域作為研究adw的候選區(qū)間。以荷蘭瓦大兩個(gè)常染色體矮小雞家系中正常體型個(gè)體與adw個(gè)體的DNA以及科尼什矮小公雞和白菜航矮小公雞的精子庫(kù)DNA為材料，對(duì)候選區(qū)間基因的功能區(qū)域進(jìn)行測(cè)序比對(duì)，獲得39個(gè)與adw性狀有一定連鎖的SN

2、P標(biāo)記，包括來自4個(gè)不同基因的9個(gè)非同義突變。 2.運(yùn)用PCR—RFLP技術(shù)，對(duì)上述4個(gè)候選基因中發(fā)現(xiàn)的功能SNP標(biāo)記與adw性狀的連鎖情況進(jìn)行分析，結(jié)果顯示ASCL4基因外顯子1中的一個(gè)引起脯氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榱涟彼幔≒—L）的C/T非同義突變僅存在于adw家系品種中。進(jìn)一步運(yùn)用PCR—RFLP技術(shù)對(duì)11個(gè)非相關(guān)的adw家系的所有個(gè)體檢測(cè)此位點(diǎn)基因型，結(jié)果表明純合的T等位基因型與adw性狀完全連鎖。 3.運(yùn)用焦磷酸測(cè)序技術(shù)對(duì)包

3、括27個(gè)中國(guó)地方雞種、1個(gè)性連鎖矮小雞品種以及1個(gè)原因不明的國(guó)內(nèi)常染色體矮小雞品種在內(nèi)的870個(gè)個(gè)體檢測(cè)ASCL4基因外顯子1中發(fā)現(xiàn)的特異SNP位點(diǎn)。結(jié)果顯示，國(guó)內(nèi)各種體型雞均只有正常的C等位基因，而未檢測(cè)到該位點(diǎn)上與矮小性狀相連鎖的T突變等位基因，說明該SNP位點(diǎn)具有極強(qiáng)的特異性，為adw家系所特有。 4.實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)ASCL4在正常白菜航雞的不同發(fā)育時(shí)期，不同組織中的表達(dá)情況。結(jié)果表明，胚胎期ASCL4主要在大腦、軀體