應(yīng)用旋轉(zhuǎn)式生物反應(yīng)器體外構(gòu)建組織工程軟骨的實驗研究.pdf

1、目的： 探討應(yīng)用HFB-40型旋轉(zhuǎn)式生物反應(yīng)器對構(gòu)建組織工程軟骨的影響。 方法： 無菌條件下解剖分離3-5天齡胎兔四肢關(guān)節(jié)軟骨，將軟骨片剪碎至約1mm3大小，再用0.25％的胰蛋白酶和0.2％的Ⅱ型膠原酶依次消化后獲取軟骨細(xì)胞。體外擴(kuò)增至第2代后，收集細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞濃度至4×107/ml，將所得軟骨細(xì)胞接種于1mm×4mm×4mm大小長方體聚乳酸聚羥基乙酸聚合物(PLGA)支架上，培養(yǎng)一周后，隨機(jī)分成A、B兩組，

2、每組10個支架。A組為實驗組，培養(yǎng)于生物反應(yīng)器內(nèi)；B組為對照組，培養(yǎng)于普通培養(yǎng)瓶內(nèi)。A組生物反應(yīng)器轉(zhuǎn)速維持在15-30轉(zhuǎn)/分鐘，保持軟骨細(xì)胞廣-PLGA支架復(fù)合物在震蕩環(huán)境下保持懸浮狀態(tài)，每2-3天換液50％-60％；B組軟骨細(xì)胞-PLGA支架復(fù)合物在靜止的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。A、B兩組連續(xù)培養(yǎng)4周。4周后采用HE染色法觀察組織工程軟骨細(xì)胞增殖及分布；甲苯胺藍(lán)染色觀察軟骨細(xì)胞硫酸糖氨多糖(GAG)的分泌和分布；Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色觀察軟骨細(xì)