合浦珠母貝珍珠層可溶性蛋白的提取分離及其在化妝品中的應(yīng)用.pdf

1、合浦珠母貝（Pinctada fucata）亦稱為馬氏珠母貝，廣泛分布于熱帶與亞熱帶沿海地區(qū)，是我國(guó)重要的海水養(yǎng)殖貝類。珠母貝貝殼的結(jié)構(gòu)可分為三層，從外到內(nèi)分別是角質(zhì)層、棱柱層、珍珠層。貝殼珍珠層和天然珍珠的顯微結(jié)構(gòu)及化學(xué)組成基本相同，均由95％以上的文石型碳酸鈣和低于5％的有機(jī)質(zhì)組成。本論文以合浦珠母貝珍珠層粉作為研究對(duì)象，研究了珍珠層可溶性蛋白的提取與純化工藝、酪氨酸酶抑制活性及其在化妝品中的應(yīng)用，具體研究?jī)?nèi)容如下:
　　(1

2、)以合浦珠母貝珍珠層粉為原料，采用水溶液浸提法提取珍珠層粉中的可溶性蛋白。以提取率作為衡量指標(biāo)，對(duì)提取液中NaCl的質(zhì)量濃度、提取時(shí)間、溶液pH值、提取溫度、料液比進(jìn)行了單因素和響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，確定了珍珠層可溶性蛋白的最佳提取工藝參數(shù)為:以0.2％NaCl溶液為提取溶劑，料液比為1∶6，溶液pH值為9，25℃恒溫?cái)嚢?5h。采用優(yōu)化后的工藝參數(shù)提取珍珠層可溶性蛋白，其得率為74.64％。
　　(2)以蛋白粗提液為原料，采用聚乙二醇

3、(PEG)/硫酸鈉(Na2SO4)雙水相體系純化珍珠層可溶性蛋白。以蛋白回收率作為衡量指標(biāo)，對(duì)雙水相體系中的PEG平均分子量、PEG質(zhì)量分?jǐn)?shù)、Na2SO4的質(zhì)量分?jǐn)?shù)、離子強(qiáng)度、蛋白粗提液加入量進(jìn)行了單因素和響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，確定了珍珠層可溶性蛋白的最佳純化工藝參數(shù)為:10 g的雙水相體系中，PEG2000、Na2SO4、KCl的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為30％、6％、1％，蛋白粗提液加入量為2mL。采用優(yōu)化后的工藝參數(shù)純化珍珠層可溶性蛋白，其得率為9

4、2.48％。
　　(3)研究了珍珠層可溶性蛋白對(duì)酪氨酸酶單酚酶和二酚酶活力的抑制作用、抑制類型及抑制機(jī)理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該蛋白對(duì)酪氨酸酶單酚酶和二酚酶活力均有良好的抑制效果，且樣品濃度與酶活力之間存在劑量依賴關(guān)系，對(duì)兩者的半抑制濃度分別為26.01 mg/mL和14.64 mg/mL。珍珠層可溶性蛋白能顯著延長(zhǎng)酪氨酸酶單酚酶催化反應(yīng)的遲滯時(shí)間;對(duì)二酚酶的抑制類型為可逆抑制，抑制機(jī)理是競(jìng)爭(zhēng)性抑制，米氏常數(shù)Km和抑制常數(shù)分別為0.21

5、 mg/mL和3.360 mg/mL。
　　(4)探索了珍珠層可溶性蛋白在化妝品中的應(yīng)用，利用乳化法制備出一種水包油(O/W)型膏霜類美白護(hù)膚品，并對(duì)該美白護(hù)膚霜的穩(wěn)定性、理化指標(biāo)和衛(wèi)生狀況進(jìn)行了綜合評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該護(hù)膚霜外觀穩(wěn)定均一，pH值(6.4)接近人體皮膚表面酸堿度，重金屬含量、菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)均符合標(biāo)準(zhǔn)，證明產(chǎn)品的感官指標(biāo)、理化指標(biāo)及衛(wèi)生指標(biāo)均達(dá)到了《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)和QB/T1857