谷氨酸-谷氨酸受體系統(tǒng)改善骨質(zhì)疏松的細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分：Ⅲ型代謝型谷氨酸受體對原代大鼠顱骨成骨細(xì)胞的影響
　　 目的：原代新生大鼠顱骨來源的成骨細(xì)胞上有Ⅲ型代謝型谷氨酸受體的表達(dá)，本研究的目的是觀察Ⅲ型代謝型谷氨酸受體在調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞功能方面的作用。
　　 材料和方法：
　　 取新生（<24h）SD大鼠顱骨細(xì)胞進(jìn)行成骨細(xì)胞培養(yǎng)，取2-3代成骨細(xì)胞進(jìn)行鋪板，給予Ⅲ型代謝型谷氨酸受體激動(dòng)劑和阻斷劑處理，分別進(jìn)行堿性磷酸酶測試和礦化檢測，隨后取處理48小時(shí)的細(xì)胞進(jìn)行

2、RNA抽提，RT-PCR，觀察OPG和RANKL的mRNA表達(dá)改變情況。
　　 結(jié)果：
　　 原代SD大鼠成骨細(xì)胞上有Ⅲ型代謝型谷氨酸受體的表達(dá)，給予特異性激動(dòng)劑處理48小時(shí)后，堿性磷酸酶活性增加了，在100uM時(shí)，ALP活性最高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；相應(yīng)的細(xì)胞毒性試驗(yàn)和增殖試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)明顯差異，阻斷劑則表現(xiàn)出相反的結(jié)果；成骨細(xì)胞在連續(xù)藥物處理18天后的礦化結(jié)節(jié)顯示，激動(dòng)劑促進(jìn)礦化結(jié)節(jié)的生成，而阻斷劑則抑制礦化結(jié)節(jié)的生成；進(jìn)一步

3、研究發(fā)現(xiàn)，激動(dòng)劑處理48小時(shí)的成骨細(xì)胞，OPG的mRNA表達(dá)水平增加了，RANKL的mRNA表達(dá)水平降低了；阻斷劑則呈現(xiàn)相反的結(jié)果.
　　 結(jié)論：原代大鼠顱骨來源的成骨細(xì)胞表達(dá)Ⅲ型代謝型谷氨酸受體；給予特異性激動(dòng)劑處理可增強(qiáng)成骨活性，促進(jìn)成骨細(xì)胞分化，阻斷劑則抑制這一進(jìn)程。
　　 第二部分：谷氨酸對去卵巢小鼠的骨量及骨生物力學(xué)的影響
　　 目的：盡管體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)提示谷氨酸受體對成骨，破骨細(xì)胞功能起著一定作用，但是

4、并沒有足夠的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)支持這一結(jié)論。本研究目的就是通過動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察谷氨酸是否參與了體內(nèi)骨骼重建，影響骨生物力學(xué)指標(biāo)，從而改善骨骼質(zhì)量。
　　 材料和方法：
　　 取8周齡雌性小鼠，隨機(jī)分為兩組，分別進(jìn)行去卵巢手術(shù)（OVX）和假手術(shù)（SHAM）；利用雙能X線吸收法（DEXA，hologic discovery LAfor small animal，USA）測小鼠全身骨密度，利用三點(diǎn)彎曲法（instron 5569，

5、GERMAN）進(jìn)行骨生物力學(xué)測試，觀察骨骼質(zhì)量變化情況，在骨生物力學(xué)指標(biāo)（如最大值彎曲載荷，斷裂時(shí)能量裂值等）出現(xiàn)下降趨勢時(shí)，給予小鼠腹腔注射谷氨酸（1mg/kg/day）一個(gè)月，再分別測全身骨密度和骨生物力學(xué)，觀察骨骼改善情況。
　　 結(jié)果：
　　 OVX小鼠于去卵巢6個(gè)月后先后出現(xiàn)骨生物力學(xué)指標(biāo)（最大值彎曲載荷（N）和斷裂時(shí)的能量值（mJ））的下降和骨密度的下降（P<0.05）。
　　 在術(shù)后6個(gè)月時(shí)給予OV