表面修飾金絲桃苷納米微球的心肌靶向性研究.pdf

1、目的:制備金絲桃苷聚乳酸納米微球(Polylactic acid Nanoparticle loadedHyperoside，HPN)并進行表面靶向性修飾。對其形態(tài)、制備工藝、體外釋藥規(guī)律、大鼠體內體外靶向性以及靶向機制進行研究，同時，研究其在大鼠體內的藥物代謝動力學過程，并對其靶向性的優(yōu)劣進行評價。
　　方法:1.采用乳化-高壓勻質法，分別制備金絲桃苷聚乳酸納米球以及表面靶向性修飾納米球(PAC-Polylactic acid

2、Nanoparticle loaded Hyperoside，PAC-HPN)。掃描電鏡觀察形態(tài)特征;激光粒度儀測定其平均粒度、粒度分布及Zeta電位。
　　2.采用均勻設計法，設立綜合評分方法，研究納米球的最佳制備工藝;差示掃描量熱法檢測納米球的制備效果。
　　3.采用高效液相色譜法，建立納米球、細胞裂解液、大鼠血漿及組織勻漿中的金絲桃苷含量測定方法。對建立的方法進行驗證考察，確定其可靠性。
　　4.透析法研究納米球

3、的藥物體外釋藥規(guī)律。釋藥數(shù)據分別經零級模型、單指數(shù)函數(shù)、雙指數(shù)函數(shù)、Weibull分布函數(shù)和Higuchi平方根函數(shù)模擬，根據AIC值和擬合度(R2)判斷評價曲線擬合優(yōu)度指標。
　　5.采用高效液相色譜法，建立表面靶向性修飾配體的摻入率檢測方法，并進行方法學驗證試驗。
　　6.以培養(yǎng)的大鼠乳鼠原代心肌細胞為靶細胞，藥物的細胞蛋白攝取率為指標，研究納米球體外靶向性;以已知的β1受體阻滯劑阿替洛爾為工具藥物，研究其體外靶向性機制

4、;以缺氧培養(yǎng)的大鼠乳鼠原代心肌細胞為靶細胞，考察金絲桃苷聚乳酸納米球與表面靶向修飾納米球對缺氧心肌細胞保護效果的差異。
　　7.分別尾靜脈注射PAC-HPN、HPN、金絲桃苷(Hyperoside，Hyp)，考察大鼠體內藥-時過程及各主要器官藥物分布，以峰濃度比Ce、相對攝取率Re及靶向效率te評價納米球的心肌靶向性。
　　結果:1.制備的HPN及PAC-HPN，掃描電鏡觀察形態(tài)特征為類球形，表面稍粗糙。激光散射粒度儀分析平

5、均粒徑及Zeta電位，HPN平均粒徑為（159±43.7）nm，粒徑范圍為106.2～226.5 nm。平均Zeta電位為（-12.7±0.23）mV; PAC-HPN平均粒徑為（200.7±44）nm，粒徑范圍為146.6～268.3 nm。平均Zeta電位為（4.57±0.24）mV。
　　2.均勻設計法確定的最優(yōu)條件為聚乳酸和藥物的投料比10％、油水體積比15％、勻質次數(shù)6次、勻質壓力15000psi。
　　差示掃描量

6、熱法結果表明，在HPN及PAC-HPN圖譜中PLA的熔點峰基本消失，同時Hyp的熔融峰完全消失，表明Hyp在HPN及PAC-HPN中以無定型存在或者被PLA包裹。
　　3.采用高效液相色譜法，建立了納米球、細胞裂解液、大鼠血漿及組織勻漿中的金絲桃苷含量測定方法。方法學考察的精密度、回收率、穩(wěn)定性、重復性等各項結果均符合檢測要求，方法簡便易行，結果準確可靠。
　　4.納米球體外釋藥試驗結果表明，HPN及PAC-HPN在釋放介質

7、中首日釋藥率分別為5.66％、4.26％;15天累積釋放率分別為56.89％、54.03％，不具有明顯的緩釋性。數(shù)據分別經各釋放函數(shù)模擬， HPN及PAC-HPN體外釋放均符合Higuchi函數(shù)模型，其釋藥曲線分別為y=0.1678t1/2-0.039、y=0.1672t1/2-0.0548其T50分別為10.32天及11.01天。
　　5.采用高效液相色譜法，建立了表面靶向性修飾配體的摻入率檢測方法，PAC的平均摻入為5.33±

8、0.11％。摻入率并不與加入量成正比，其保持相對穩(wěn)定。方法學考察的精密度、回收率、穩(wěn)定性、重復性各項結果均符合檢測要求，方法簡便易行，結果準確可靠。
　　6.體外靶向性研究結果表明，HPN及PAC-HPN的藥物總攝取率分別0.141ng/μg、0.032ng/μg。其中，細胞胞吞方式攝取率分別為0.088 ng/μg、0.005 ng/μg。
　　加入β1受體阻滯劑Atenolol后，PAC-HPN的心肌細胞攝取明顯被抑制(

9、P＜0.001)，而對HPN的攝取沒有明顯變化（P＞0.05）。說明Atenolol競爭性抑制了心肌細胞對PAC-HPN的攝取，PAC-HPN具有心肌細胞靶向作用。
　　對缺氧心肌細胞藥物攝取率試驗結果表明，在常氧狀態(tài)下培養(yǎng)2、4、24 h，心肌細胞對PAC-HPN攝取率分別為HPN攝取率的3.72、4.73、4.67倍。而缺氧條件下，心肌細胞對PAC-HPN攝取率分別為HPN攝取率的4.32、6.27、42.5倍，增加倍數(shù)明顯高

10、于常氧狀態(tài)，說明由于缺氧使得心肌細胞表面的β1受體數(shù)量顯著增加，PAC-HPN對缺氧心肌細胞的靶向性更為突出，且隨著缺氧狀態(tài)的持續(xù)，其靶向性越來越顯著。
　　7.大鼠尾靜脈分別注射PAC-HPN、HPN、Hyp，給藥劑量按Hyp計算為12mg/kg。體內藥-時數(shù)據經PKSolver擬合處理，PAC-HPN、HPN、Hyp的血漿t1/2、 Tmax、Cmax、AUC分別為4.78h、1.0h、18.88μg/ml、59.66μg/m

11、l*h;3.04h、1.0h、14.15μg/ml、50.28μg/ml*h;2.07h、0.5h、28.22μg/ml、50.16μg/ml*h。
　　PAN-HPN在血漿、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟各組織中的靶向參數(shù)與HPN比較，其峰濃度比Ce分別為1.33、1.68、0.55、0.58、0.37、1.19，相對攝取率Re分別為1.19、1.69、0.63、0.53、0.29、1.02;與Hyp比較，其峰濃度比Ce分別為0.