利用分子生物學(xué)技術(shù)對幾種水產(chǎn)加工品原料的鑒定研究.pdf

1、近年來，隨著人們生活水平的不斷提高，大西洋鮭魚、鱈魚等高值水產(chǎn)品的消費量逐年增大。隨著水產(chǎn)品貿(mào)易量增加，加工方式多樣化，水產(chǎn)品及其加工品相關(guān)的商業(yè)欺詐現(xiàn)象也在增加，采用低值水產(chǎn)品冒充高值水產(chǎn)品的行為時有發(fā)生，不僅破壞了水產(chǎn)品貿(mào)易的公平性，也損害了消費者的合法權(quán)益，甚至帶來食品安全問題。因此建立快速、簡便的水產(chǎn)品種類鑒定方法，對于規(guī)范水產(chǎn)品市場、保護消費者權(quán)益至關(guān)重要，對于維護水產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要的意義。
　　傳統(tǒng)的水產(chǎn)品鑒

2、定方法主要依據(jù)水產(chǎn)品的外部形態(tài)和解剖特征，但這種方法不適用于加工后的水產(chǎn)品種類鑒定。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，DNA已經(jīng)被證明幾乎是所有生物最主要的遺傳物質(zhì)，基于DNA技術(shù)的分子生物學(xué)方法在鑒定食品真?zhèn)畏矫姘l(fā)揮越來越重要的作用。本論文研究了基于PCR技術(shù)的水產(chǎn)加工品種類鑒定方法。
　　針對不同水產(chǎn)加工品進行DNA提取方法的比較。以凍魚塊、烤魚片、魚罐頭共3種主要水產(chǎn)加工品為研究對象，比較CTAB法、改良CTAB法、酚-氯仿法、

3、SDS法以及5種試劑盒法共9種方法對3種主要水產(chǎn)加工品DNA提取效果。通過比較DNA得率以及純度對各提取方法進行評價，并采用PCR方法對實驗樣品的真?zhèn)芜M行了初步鑒別。結(jié)果表明9種提取方法對于3種水產(chǎn)加工品所提取DNA得率相差較大，對于凍魚塊采用TIANGEN深加工食品DNA提取試劑盒提取DNA得率最高(1.223μg/mg)，純度(A260\A280)為2.0;對于烤魚片采用SDS法提取得率最高(0.505μg/mg)，純度(A260\

4、280)為2.03;對于魚罐頭采用SDS法提取DNA得率最高為(0.594μg/mg)，純度(A260\A280)為1.93。所提取DNA可滿足后續(xù)PCR鑒定實驗的要求。本實驗改進并篩選出水產(chǎn)加工品DNA提取的最佳方法，為后續(xù)水產(chǎn)加工品的原料真?zhèn)畏肿由飳W(xué)鑒別奠定了實驗基礎(chǔ)。
　　利用PCR-FINS方法對大西洋鮭(Salmosalar)以及市場上常被用來冒充大西洋鮭的虹鱒(Oncorhynchusmykiss)和白斑紅點鮭（Sa

5、lvelinusleucomaenis）進行鑒別，對三種魚類COI和16SrRNA部分序列測序，利用DNAMAN6.0和MEGA4.1軟件對測得序列進行分析，計算三種魚類堿基組成，種問遺傳距離和種內(nèi)遺傳距離，利用鄰接法構(gòu)建了分子系統(tǒng)樹。結(jié)果表明:三種魚類種問遺傳距離顯著大于種內(nèi)遺傳距離，三種魚類16SrRNA基因較COI基因相對保守，三種魚類在系統(tǒng)樹分類中分別形成各自獨立的分支，表明以COI和16SrRNA基因作為標(biāo)記基因可以對大西洋鮭

6、及常被用來冒充大西洋鮭的虹鱒和白斑紅點鮭進行鑒別。
　　采用DNAMAN6.0對大西洋鮭(Salmosalar)及常被用來冒充大西洋鮭的虹鱒(Oncorhynchusmykiss)和白斑紅點鮭(Salvelinusleucomaenis的線粒體COI基因部分序列進行分析，建立限制性內(nèi)切酶圖譜，選擇ApaⅠ，BstⅪ，HindⅢ，SacⅠ，VspⅠ共五種限制性內(nèi)切酶用于三種魚類PCR-RFLP的分析。采用限制性內(nèi)切酶對三種魚類線粒體

7、COI基因進行酶切，酶切結(jié)果與分析結(jié)果吻合，沒有非特異性酶切條帶的出現(xiàn)，酶切片段均能通過電泳進行明顯的區(qū)分。結(jié)果表明，本研究選取五種限制性內(nèi)切酶，共六種組合方式對三種魚類進行鑒別，建立的PCR-RFLP方法能快速鑒別大西洋鮭、虹鱒和白斑紅點鮭。
　　采用FINS方法對市售鱈魚樣品進行鑒別研究，通過對鱈魚樣品線粒體COI和16SrRNA部序列進行測序，鑒別各商品化鱈魚樣品中魚源性成分，以判定其與標(biāo)簽中注明是否相符。結(jié)果顯示，17種凍

8、鱈魚塊樣品中，有7種存在貼標(biāo)不明確的現(xiàn)象，未標(biāo)明物種的凍鱈魚塊主要為價格較便宜的狹鱈;采用油炸、水煮、烘干后的鱈魚樣品依然可以進行準(zhǔn)確鑒別;采集的4種烤鱈魚片樣品測序結(jié)果均與商品名稱不符，四種烤鱈魚片樣品分析結(jié)果分別為網(wǎng)紋獅子魚（Liparischefuensis）、月尾兔頭鲀（Lagocephaluslunaris）、暗紋東方鲀（Takifugufasciatus）、黑尾吻鰻（Rhynchocongerectenurus）。結(jié)果表明利