LY294002對(duì)人乳腺癌耐藥細(xì)胞株MCF-7-ADR的耐藥逆轉(zhuǎn)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路特異性阻滯劑LY294002對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和耐藥細(xì)胞株MCF-7/ADR的化療效果影響及其機(jī)制。
　　 方法：分別取人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和人乳腺癌耐藥細(xì)胞株MCF-7/ADR加入阿霉素以及聯(lián)合LY294002。MTT法分別測(cè)定兩種細(xì)胞的LY94002安全濃度。不同濃度梯度阿霉素0.1，0.2，0.4，0.8μmol/L分別作用與兩種細(xì)胞，MTT法測(cè)定MCF-7/ADR耐藥細(xì)胞

2、株的耐藥倍數(shù)。并用安全濃度的LY294002聯(lián)合作用，測(cè)定不同濃度LY294002(0.1μmol/L，2.5μmol/L，5μmol/L，10μmol/L)對(duì)乳腺癌耐藥細(xì)胞株MCF-7/ADR的抑制效率。流式細(xì)胞術(shù)觀察上述各組細(xì)胞生長(zhǎng)周期及凋亡率的變化。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩種濃度的LY294002(0.1μmol/L，2.5μmol/L，5μmol/L，10μmol/L)作用上述細(xì)胞后，觀察細(xì)胞內(nèi)阿霉素濃度的變化。
　　 結(jié)果

3、：(1)MTT實(shí)驗(yàn)：LY294002在濃度10μmol/L以下時(shí)對(duì)兩種細(xì)胞基本無(wú)毒性，細(xì)胞存活率均＞98％。乳腺癌細(xì)胞MCF-7和耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR的IC50分別為0.14±0.02和15.74±0.08，耐藥指數(shù)為112，加入安全范圍的不同濃度的LY294002培養(yǎng)48h后，MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞IC50均下降，但以MCF-7/ADR細(xì)胞下降明顯，逆轉(zhuǎn)指數(shù)明顯升高，相對(duì)逆轉(zhuǎn)率也明顯升高，具有顯著性差異(P＜0.01

4、)，逆轉(zhuǎn)作用與LY294002劑量呈正相關(guān)(P＜0.01)(2)細(xì)胞凋亡和周期測(cè)定：細(xì)胞凋亡取不同濃度LY294002(0.1、2.5、5.0、10μmol/L)聯(lián)合阿霉素作用于兩種細(xì)胞后，論是MCF-7還是耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR，細(xì)胞凋亡率均增加，但以耐藥細(xì)胞凋亡率增加更明顯，LY294002高濃度組較低濃度組增加也更明顯。組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。阿霉素為周期非特異性抗腫瘤藥，加藥后細(xì)胞各期阻滯不一，加用LY29

5、4002后對(duì)其細(xì)胞各周期分布的影響沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。(3)流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞內(nèi)阿霉素含量的變化：對(duì)于乳腺癌細(xì)胞株MCF-7，細(xì)胞內(nèi)阿霉素?zé)晒鈴?qiáng)度變化各組中無(wú)明顯差異；而對(duì)于乳腺癌耐藥細(xì)胞株MCF-7/ADR，0.1、2.5μmol/LLY294002處理組與陰性對(duì)照組相比仍無(wú)明顯差異(P＞0.05)，5、10μmol/LLY294002處理組與陰性對(duì)照組相比細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度明顯增加。兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。