一僅有男性患者的leber遺傳性視神經(jīng)病變家系分子生物學(xué)分析.pdf

1、目的：分析一未攜帶原發(fā)突變且僅有男性患者的Leber遺傳性視神經(jīng)病變家系的臨床表型、遺傳特征，檢測(cè)其突變基因，探討是否與X染色體有關(guān)。
　　 方法：收集河南安陽一僅有男性患者且臨床診斷為L(zhǎng)HON家系的臨床資料，分析遺傳特征；用Primer5設(shè)計(jì)線粒體引物，PCR(polymerase chain reaction)測(cè)序重新檢測(cè)該家系是否攜帶3個(gè)原發(fā)突變。對(duì)先證者線粒體基因(mitochondrialDNA，mtDNA)全測(cè)序，將

2、測(cè)序結(jié)果與修正的mtDNA劍橋標(biāo)準(zhǔn)序列比對(duì)，確定該家系的突變位點(diǎn)，然后在專業(yè)遺傳學(xué)網(wǎng)站上查找這些突變位點(diǎn)的相關(guān)信息，必要時(shí)進(jìn)行對(duì)照人群mtDNA測(cè)序分析，以確定致病突變；在ABI PRISM()Linkage Mapping Set Version2.5試劑盒中挑選可以覆蓋整條X染色體的18個(gè)微衛(wèi)星熒光標(biāo)記對(duì)家系內(nèi)成員進(jìn)行X染色體掃描，Genotyper3.7軟件進(jìn)行基因分型，Linkage和Merlin1.1.2軟件進(jìn)行連鎖分析，初步

3、定位可能存在X連鎖修飾基因的區(qū)域，進(jìn)一步進(jìn)行精細(xì)掃描和定位，最后利用Cyrillie軟件構(gòu)建單倍體型圖，確定是否存在X染色體連鎖修飾基因。
　　 結(jié)果：此家系符合母系遺傳特征，30位母系成員中6人發(fā)病，且全部為男性，表現(xiàn)出低外顯率和男性患病偏倚的特點(diǎn)。重新測(cè)序發(fā)現(xiàn)該家系未攜帶3個(gè)原發(fā)突變。先證者mtDNA全測(cè)序結(jié)果發(fā)現(xiàn)31個(gè)同質(zhì)突變位點(diǎn)，其中包括1個(gè)已報(bào)道的致病突變位點(diǎn)G3635A和2個(gè)未報(bào)道過的突變點(diǎn) ND4 T11809C與

4、ND5A12340G。T11809C為無義突變，A12340G為錯(cuò)義突變，剩余28個(gè)突變點(diǎn)均為已報(bào)道過的線粒體多態(tài)，該先證者屬于線粒體單倍體型F1。MtDNA測(cè)序所有其它母系成員均同時(shí)攜帶G3635A和A12340G突變。107位正常家系外對(duì)照中不存在G3635A和A12340G突變。連鎖分析在DXS1060得到最大兩點(diǎn)LOD值1.46(θ=0.0)，但是兩點(diǎn)非參數(shù)分析和多點(diǎn)非參數(shù)分析結(jié)果顯示所有標(biāo)記p>0.05，單倍體型分析圖未發(fā)現(xiàn)共