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文檔簡介
1、目的:
明確HSPC111在前列腺癌中的表達(dá)情況及其對前列腺癌細(xì)胞體外生物學(xué)行為的影響,探討HSPC111在前列腺癌進(jìn)展中的作用。
方法:
運(yùn)用RT-qPCR方法檢測HSPC111在前列腺癌和前列腺增生組織中的表達(dá)量;利用RT-qPCR及Western Blot檢測HSPC111在正常前列腺細(xì)胞系RWPE-1以及前列腺癌細(xì)胞系LNCaP和PC3中的表達(dá)量;構(gòu)建含HSPC111短發(fā)卡RNA(shRNA)的慢病
2、毒載體,轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選及挑選單克隆后獲得穩(wěn)定低表達(dá)HSPC111的PC3細(xì)胞株,并利用RT-qPCR及Western Blot驗(yàn)證轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中HSPC111的表達(dá)量;運(yùn)用細(xì)胞計(jì)數(shù)法和MTT法檢測HSPC111低表達(dá)PC3細(xì)胞的增殖能力,利用Transwell法檢測HSPC111低表達(dá)PC3細(xì)胞侵襲能力,磷脂酰絲氨酸外翻分析(AnnexinⅤ)檢測HSPC111低表達(dá)PC3細(xì)胞的凋亡情況;通過測定細(xì)胞內(nèi)蛋白含量檢測HSPC
3、111異常表達(dá)對細(xì)胞蛋白合成的影響。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
結(jié)果:
與前列腺增生組織相比,HSPC111在前列腺癌組織中高表達(dá);與正常前列腺細(xì)胞系RWPE-1相比,HSPC111在前列腺癌細(xì)胞系LNCaP及PC3中高表達(dá),而LNCaP與PC3之間無明顯差異;利用含HSPC111特異性shRNA的慢病毒載體轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞可建立HSPC111穩(wěn)定低表達(dá)的細(xì)胞;降低內(nèi)源性HSPC111表達(dá)可
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