大豆苯丙氨酸解氨酶基因克隆、表達(dá)與活性鑒定.pdf_第1頁(yè)
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1、中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文大豆苯丙氨酸解氨酶基因克隆、表達(dá)與活性鑒定姓名：宋柬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：食品科學(xué)與工程指導(dǎo)教師：陳尚武20060601AbstractPhenylalanineammonialyase(PAL，EC4315)isthefirstessentialenzymeofphenylpropanoidmetabolisminplantAllbiomasscontaining妞曲enylpropaneskeletonar

2、esyntheisedbythispathwaydirectlyorindirectlyPALasalinkoftheprimarymetabolismandthephenylpropanesecondarymetabolism，notonlyhastheveryvitalroleregardingphysiologicalmetabolismandtheresistanceofadversestressinplantalsohasth

3、egreatpracticalsignificanceandtheapplicationvalueinmedicalapplicationandfinechemicalindustryOurcountryisthesourceareaofcultivatingsoybean(Olycinemax)，hasmolethan5000yearscultivationhistoryThesoybeanisoflavonesrelyingonph

4、enylpropanemetabolismpathwayhavemultiplehealthcarefunctionandpharmacologicalactions，Inordertofurtherunderstandingthepropanoidpathwayandindepthutilizingoursoybeanidioplasmresources，thenativecultivatedsoybeanofnorthernChin

5、aWasusedasthestartingmaterialtoclonethePALcompletegenefromthegenomicDNA，thenexpressedinSaccharomyceseerevisiaestrainFY834andPALwasnoactiveSplicingbyOverlapExtension(SOE)methodWashiredasgenerecombinationtechnologytogetoff

6、theintronfromfulllengthPALgenethenobtainedGMPALexonEscherichiacobexpressionvectorpETGMPALWasconstructedandWassuccessfullyexpressedin晟cellBL21(DE3)strains，Molecularwei贍toftheexpressedPALproteinWasestimatedtobe779KDandthea

7、mountsofPALproteinexpressionlevelWas8％intotalEcellsolubleproteinsbySDSPAGETheresultofpeptidemassfingerprinting(PMF)showedthattheproteinscorewas84andgreaterthan78signficantlyonp005totheGtycinemaxPALbymatrixassistedlaserde

8、sorptionionizationtimeofflightmassspectroscopy(MALDITOFMS)CatalyticactivityofconversionLlphenylalanineintocinnamicacidbythe點(diǎn)coRexpressedrecombinantGMPALwasachieved甜highspeciticactivi銣坤to21179molg1proteinmin～(3529I_tkatk9

9、1)’higherthanparsleyrecombinantPAL，andRhotodotorulaglutimPAL，苫hekineticcharacteroftherecombinantGMPALWasassayedTheVm“WaS349nmolL。。min“andKmWas1054mmolL～byHaneswWoolfplotUndertheconditionofpH100，15％cinnamieacidand8reel誓‘N

10、Hs，LPheWasobtain秘bycatalyseoftheGMPAL，asthereve[sereactionofLPhetocinnamieacidTheconversionrateofcinnamicacidintoL。Phereached398％ResultsindicatedthatsoybeanrecombinantPALWasefficientlyexpressedinEcobasfullyactivatedfunct

11、ionalenzymeTheexperimentalresultsindicatedthatthesoybeanrecombinationPALthroughexpressionvectorpETGlvtPALWasefficientlyexpressedin最coti矗sfullyactivatedfunctionalenzyme。Itprovidestheresearchfoundationforthefurtherfoodandt

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