DDR2基因缺失對小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞生物學特性影響的研究.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone Mesenchymal Stem Cells，BMSCs)是現(xiàn)階段研究廣泛的一種重要的成體干細胞。因其具有良好的生長、分化能力以及向多種細胞分化的潛能，成為研究骨再生工程中重要的種子細胞，它對骨組織缺損的修復有著良好的效果。但是BMSCs向成骨細胞分化并修復骨組織缺損是一個復雜的過程，是由許多細胞外因子共同作用產(chǎn)生的結(jié)果。近年來的研究證實DDR2（Discoidin Domain Receptor2）作為I型

2、膠原的特異性受體，在成骨細胞的分化中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。而對于其在BMSCs向成骨細胞的分化過程中所起到的作用還鮮有研究，對其作用機理尚不明確。本實驗通過DDR2基因缺失小鼠BMSCs的分離、培養(yǎng)和鑒定，初步探索DDR2基因缺失對小鼠BMSCs成骨分化能力的影響，為進一步研究BMSCs的成骨分化能力奠定理論基礎。
　　研究內(nèi)容與方法：
　　1. DDR2基因缺失小鼠BMSCs細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定。
　　2. DDR2

3、對于BMSCs細胞特異性分化特性的影響作用。
　　3. DDR2基因缺失對于BMSCs增殖、凋亡、分化的調(diào)控作用。
　　4.DDR2基因缺失對于BMSCs成骨能力的影響。
　　5. DDR2基因缺失對BMSCs在動物體內(nèi)骨組織修復能力的影響。
　　我們采用了利用改良型全骨髓貼壁法分離培養(yǎng) DD R2基因缺失小鼠及野生型小鼠的BMSCs，觀察對比兩種細胞形態(tài)；流式細胞技術檢測兩種細胞表面標記分子的表達；MTT分析檢

4、測細胞生長周期;流式細胞技術檢測細胞凋亡情況，將兩種細胞進行成骨、成脂誘導后，real time-PCR檢測兩種BMSCs成骨誘導3,7,14天后，其成骨相關基因的表達量變化；以及對成骨分化相關蛋白的檢測；包括 ALP、茜素紅染色及O C N、ALP蛋白定量檢測。
　　最后采用小鼠顱骨缺損的模型，將BMSCs與支架材料HA/TCP復合后植入骨缺損區(qū)，在成骨6周后進行MicroCT掃描及HE染色，觀察DDR2基因缺失對小鼠成骨能力的

5、影響
　　研究結(jié)果與結(jié)論：
　　1．成功分離培養(yǎng)出 DDR2基因缺失小鼠的 BMSCs，其生長狀態(tài)與正常野生小鼠的BMSCs相同，外形均呈長梭形，可見細胞成旋渦狀緊密排列生長，其表面標記物的表達符合間充質(zhì)干細胞的特點，細胞具有體外誘導成骨與成脂分化的能力，證明培養(yǎng)的細胞是BMSCs。
　　2.DDR2基因缺失后，對BMSCs的凋亡略有抑制作用，但并不影響其正常的生長與傳代。
　　3.體外對兩種 BMSCs進行成骨

6、和成脂誘導分化后發(fā)現(xiàn)，DDR2基因缺失后，BMSCs的成骨分化能力明顯減弱，對其成脂分化能力略有減弱。
　　4.兩種BMSC s經(jīng)成骨誘導以后，發(fā)現(xiàn)DDR2基因缺失后BMSCs的堿性磷酸酶活性降低，OCN分泌減少，對其成骨相關基因的表達量有明顯的抑制作用。
　　5.體內(nèi)實驗證實了DDR2基因缺失的BMSCs的骨修復能力明顯低于正常野生型小鼠的BMSCs。
　　本研究結(jié)果證實DDR2基因缺失后，對于BMSCs細胞形態(tài)特征