2型糖尿病人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及體外示蹤.pdf

1、目的： 探討2型糖尿病人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的生物學(xué)特性并研究其增殖、凋亡、分化及旁分泌能力。用BrdU、DAPI、SPIO標(biāo)記細(xì)胞進(jìn)行體外示蹤。為MSCs治療2型糖尿病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)人MSCs，傳代擴(kuò)增，倒置顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原，添加誘導(dǎo)液誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞分化并加以鑒定。比較正常人和2型糖尿病人MSCs的增殖、凋亡、

2、分化及旁分泌能力。BrdU、DAPI、SPIO進(jìn)行體外標(biāo)記并計(jì)算標(biāo)記率。 結(jié)果： 密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法能有效分離純化MSCs，細(xì)胞呈均一的成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)，以長(zhǎng)梭形為主，細(xì)胞存活率均大于95％；流式細(xì)胞儀檢測(cè)MSCs表面抗原CD44、CD45、CD71、CD105(SH2)；誘導(dǎo)人骨髓MSCs向成骨細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞分化，T2DM與正常人的MSCs比較差異不顯著；MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示在第1-6代兩組OD值差異不

3、顯著(P＞0.01)；正常組分泌的HGF為(13316±1421)pg/106個(gè)細(xì)胞)，VEGF為(1582±131)pg/106個(gè)細(xì)胞；T2DM細(xì)胞組分泌的HGF為(13321±1552)pg/106個(gè)細(xì)胞，VEGF為(14334±142)pg/106個(gè)細(xì)胞，兩組HGF比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05) T2DM組MSCs分泌的VEGF低于正常組(P＜0.05)。 結(jié)論： 1、本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Percoll密度梯度離心法和貼