HDM通過(guò)肺泡巨噬細(xì)胞TLR4誘導(dǎo)哮喘小鼠氣道炎癥的機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:
　　 支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱哮喘)是一種由多種炎癥細(xì)胞和炎癥因子參與的慢性氣道炎癥性疾病[1],“衛(wèi)生假說(shuō)”并不能解釋所有的哮喘現(xiàn)象。哮喘病因?qū)W研究顯示,哮喘是遺傳和環(huán)境因素作用的結(jié)果,或者說(shuō)是固有免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)相互作用的結(jié)果。所以,研究哮喘病因?qū)W中兩個(gè)免疫系統(tǒng)間的相互作用,將會(huì)有助于進(jìn)一步明確哮喘的病因和發(fā)病機(jī)制。
　　 近年來(lái),室內(nèi)灰塵、內(nèi)毒素、病毒感染等在哮喘氣道炎癥中的作用越來(lái)越受到關(guān)注,室內(nèi)灰塵

2、(HDM)是存在于周圍環(huán)境中的一類重要的病原微生物成分,我們?cè)噲D運(yùn)用HDM干預(yù)小鼠哮喘模型,研究HDM通過(guò)TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞(AM)活化,探討TLR4激活進(jìn)而誘導(dǎo)AM的活化在哮喘小鼠氣道炎癥中的作用,從而更加深入明確哮喘的病因和發(fā)病機(jī)制。
　　 研究方法:
　　 雌性BALB/c小鼠30只,隨機(jī)分為哮喘模型組(OVA)A,HDM處理組(100mg/L HDM+OvA)B和對(duì)照組(生理鹽水)C。用卵白蛋白

3、(OVA)致敏與激發(fā)建立小鼠哮喘模型；蘇木素伊紅(HE)染色觀察小鼠氣道及肺組織病理變化；光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞分類及計(jì)數(shù)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELIsA)檢測(cè)各組小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)上清中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的含量；實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法測(cè)定AM的TLR4的表達(dá),流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)檢測(cè)AM的CD80、CD86的表達(dá)。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:檢測(cè)結(jié)果

4、均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,各組間比較采用方差分析,組間兩兩比較采用LSD法,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.小鼠哮喘模型成功建立的臨床表現(xiàn)
　　 以小鼠出現(xiàn)明顯的煩躁不安,活動(dòng)頻繁,呼吸急促,腹肌抽搐,大、小便失禁,毛發(fā)豎起,部分小鼠出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍,動(dòng)作遲緩等為哮喘成功的標(biāo)志。
　　 2.HE染色觀察小鼠肺組織病理學(xué)改變。
　　

5、高倍顯微鏡下觀察可見(jiàn),A組支氣管黏膜下水腫,黏液腺增生,黏膜及黏膜下層、平滑肌外均可見(jiàn)大量以嗜酸性粒細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；B組肺泡隔斷裂,肺間質(zhì)充血。肺泡腔內(nèi)中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞大量浸潤(rùn) C組氣道上皮無(wú)增厚,氣道周圍無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡壁結(jié)構(gòu)完整。
　　 3.各組小鼠BALF中炎癥細(xì)胞的表達(dá)水平
　　 與A組相比,B組細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞水平顯著增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而嗜酸性粒細(xì)胞差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

6、>0.05)。
　　 4.各組小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的表達(dá)水平
　　 A組BALF上清中 IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ水平顯著高于C組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),B組BALF上清中IL-4、IL-5和IL-13的水平顯著高于A組(P<0.05),而IFN-γ差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 5.各組小鼠AM的TLR4的表達(dá)水平
　　 與A

7、組相比,B組AM的TLR4mRNA的表達(dá)能力顯著增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而A組與C組AM的TLR4mRNA表達(dá)能力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 6.各組小鼠AM中CD80、CD86的表達(dá)水平
　　 與A組相比,B組CD80分子表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),CD86表達(dá)能力顯著增強(qiáng)(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.AM的TLR4是介導(dǎo)HDM引起免疫應(yīng)答和機(jī)體炎癥

8、的主要受體,HDM可誘導(dǎo)哮喘小鼠AM的TLR4mRNA的表達(dá)上調(diào),而OVA并不能刺激TLR4表達(dá)增強(qiáng)。
　　 2.CD86協(xié)同Th2的產(chǎn)生,促進(jìn)體液免疫,下調(diào)細(xì)胞免疫,Th2細(xì)胞克隆的產(chǎn)生及炎癥介質(zhì)的釋放更加依賴于CD86/CTLA4相互作用所提供的共刺激信號(hào)。
　　 3.HDM通過(guò)AM的TLR4的高表達(dá)誘導(dǎo)AM的活化,加重哮喘的氣道炎癥。
　　 意義:我們通過(guò)HDM干預(yù)小鼠哮喘模型,進(jìn)一步明確了HDM通過(guò)TLR