人類轉(zhuǎn)錄因子蛋白AP-2delta的基因克隆和功能研究.pdf

1、AP-2轉(zhuǎn)錄因子家族是具有特異的DNA序列結(jié)合的蛋白，在多種組織和器官的發(fā)育和分化過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。目前發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物的AP-2家族有五個(gè)成員，分別是AP-2α、AP-2β、AP-2γ、AP-2δ和 AP-2ε，該家族在發(fā)育進(jìn)化過(guò)程中對(duì)基因的表達(dá)有著非常重要的調(diào)控作用。AP-2δ蛋白是我們發(fā)現(xiàn)的一個(gè)位于染色體6p12-p21.1和AP-2β串連的家族新成員，由452個(gè)氨基酸殘基組成，在DNA結(jié)合以及形成二聚體的區(qū)域與其它AP-2蛋白有

2、很高的相似性，這正是AP-2家族蛋白的典型結(jié)構(gòu)。但是AP-2δ蛋白有明顯的不同，主要是AP-2δ缺乏Pγ結(jié)構(gòu)和一些與轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性有重要關(guān)系的保守氨基酸殘基，盡管這樣，AP-26蛋白仍然能正常發(fā)揮反式轉(zhuǎn)錄激活功能。AP-2δ擁有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和特異的表達(dá)譜，很有可能在哺乳動(dòng)物發(fā)育過(guò)程中通過(guò)獨(dú)特的機(jī)制而發(fā)揮獨(dú)特的功能。RT-PCR 結(jié)果發(fā)現(xiàn)AP-2δ在成人腦、骨骼肌、胎盤、胸腺、小腸、睪丸和前列腺中的表達(dá)量較高。為了研究AP-2δ蛋白的功能，我

3、們利用基因芯片方法，大規(guī)模篩選AP-2δ的轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因。并通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR來(lái)驗(yàn)證芯片篩選的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)AP-2δ能明顯地調(diào)節(jié)基因ACE2、EIF4B、Cep290、MSN、RPL29、CAPNS1、HMOX1、ITSN1、LDOC1L、PDGFC和RPL29的表達(dá)。 雙色熒光素酶報(bào)告檢測(cè)系統(tǒng)檢驗(yàn)的結(jié)果表明轉(zhuǎn)染AP-2δ后的AD293 和NIH3T3 細(xì)胞能顯著激活血紅素加氧酶(HMOX1)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列。因此我們主要研究AP-2

4、δ對(duì)血紅素加氧酶的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列的激活作用。 我們利用雙色熒光素酶報(bào)告檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)血紅素加氧酶的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列進(jìn)行缺失研究，結(jié)果表明AP-2δ的作用位點(diǎn)位于上游轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列-206bp-1bp 之間。接下來(lái)對(duì)該片斷中存在的AP-2家族比較保守的一致性結(jié)合序列進(jìn)行突變發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄活性基本沒有變化，因此我們初步認(rèn)為AP-2δ有其特異性的結(jié)合位點(diǎn)。接下來(lái)我利用凝膠阻滯電泳實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)AP-2δ的DNA結(jié)合序列，結(jié)果顯示AP-26δ與AP-2家族