羅通定HPLC血濃度測定、羅通定口崩片崩解特性及人體生物等效性評價.pdf

1、目的：建立生物樣本羅通定濃度高效液相色譜測定方法；進行羅通定口腔崩解片口腔崩解試驗；進行羅通定口腔崩解片人體藥代動力學(xué)研究。以市售羅通定片為參比制劑，采用單劑口服給藥雙周期雙交叉試驗設(shè)計，評價口腔崩解片與普通片的生物等效性，比較口腔崩解片吸收、分布、排泄特點；考察口腔崩解片口感、崩解時限等制劑特征；為制劑開發(fā)及其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：1分析方法建立色譜條件phenomenexluna5μmC18(2)250mm×4.6m

2、m色譜柱；流動相為甲醇-水(75/25，V/V)，用前經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾并經(jīng)超聲脫氣；流速1.0ml·min-1；柱溫室溫；檢測波長281nm。血樣處理取血漿1ml，加入5μg·ml-1內(nèi)標(biāo)溶液50μl，混勻，加入6.0ml提取液，渦旋2min，4000rpm離心10min，取上清液4.0ml，37°C水浴氮氣吹干，100μl流動相復(fù)溶，取30μl進樣測定。 2口腔崩解試驗漱口、清潔口腔，取羅通定口腔崩解片2片置于舌上，

3、，嘴自然合攏，不吞咽，3分鐘后用100ml純凈水多次漱口，收集漱口液。漱口液100ml定容，加甲醇150ml，經(jīng)處理采用高效液相色譜法測定羅通定含量，根據(jù)色譜峰面積計算吸收量。 3人體藥代動力學(xué)試驗設(shè)計為單劑三交叉口服試驗設(shè)計。6名志愿者隨機分為三組。志愿者編號為1～6。志愿者于試驗前一天晚10時后禁食，試驗前10分鐘50ml溫水漱口，試驗當(dāng)日晨抽取空白血樣后，立即空腹服用參比制劑60mg或試驗制劑60mg。將試驗制劑置于舌面，

4、不用水，不咀嚼，待崩解后隨唾液自然吞咽入胃。Ⅰ組志愿者口含試驗制劑羅通定口崩片(T1)，Ⅱ組志愿者舌下含服試驗制劑羅通定口崩片(T2)，Ⅰ組、Ⅱ組志愿者服藥20分鐘后飲用溫水100ml，Ⅲ組志愿者服用參比制劑羅通定片(R)，100ml溫水送服。服藥2h后方能飲水，4小時后進食標(biāo)準(zhǔn)低脂肪、低蛋白早餐。于服藥后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0h取肘靜脈血4ml，并立即移入涂有肝素的塑

5、料試管中，3500rpm離心15min，取血漿于-20°C儲存?zhèn)錅y。 4人體生物等效性試驗設(shè)計給藥采用單劑口服給藥雙周期雙交叉試驗設(shè)計。篩選男性健康志愿者20名，按體重配對隨機分為兩組，分別于試驗當(dāng)日晨空腹一次口含試驗制劑羅通定口崩片或口服參比制劑羅通定片60mg。取血于藥前和藥后10min，20min，30min，45min，60min，75min，1.5h、2.0h、3.0h、4.0h、6.0h、8.0h、12.0h、24.

6、0h取肘靜脈血4m1，離心，取血漿-20°C儲存?zhèn)錅y。5數(shù)據(jù)處理血漿樣本經(jīng)去蛋白預(yù)處理后，采用高效液相色譜法測定羅通定經(jīng)時血濃度，采用DAS2.0實用藥代動力學(xué)程序擬合羅通定血濃度-時間曲線，計算羅通定藥代動力學(xué)參數(shù)，評價羅通定口腔崩解片與市售普通片的生物等效性。 6臨床觀察記錄羅通定口腔崩解片口感、異味、崩解速度、時限，困倦出現(xiàn)時間，以及志愿者用藥前后血壓、心率變化。 結(jié)果：1方法學(xué)考察色譜條件下羅通定保留時間為8.2

7、min；在0.01μg～1μg.ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；當(dāng)信噪比(S/N)≥2時，血漿最低檢出濃度為0.01μg.ml-1；0.02，0.1，0.8μg·ml-1三濃度日內(nèi)、日間變異系數(shù)(n=5)分別為5.00﹪和4.142﹪，2.869﹪和4.218﹪，0.760﹪和0.417﹪；回收率變異系數(shù)(n=5)分別為6.734﹪，2.436﹪和0.322﹪。 2樣本和方法學(xué)穩(wěn)定性0.02，0.1，0.8μg·ml-1三濃度反復(fù)凍

8、融2次，或-20°C儲存24小時或1周，變異系數(shù)(n=5)均小于10﹪。隨行樣本測定的質(zhì)控樣本變異系數(shù)(n=10)均小于10﹪。 3羅通定口腔崩解片與普通片藥動學(xué)參數(shù)羅通定口崩片和羅通定片單劑量經(jīng)口給藥羅通定主要藥代動力學(xué)參數(shù)t1/2為10.177±1.623h和10.931±1.5994h，Tmax為0.583±0.149h和1.038±0.203h，Cmax為0.227±0.092μg·ml-1和0.208±0.080μg·

9、ml-1，AUC0～24為0.926±0.245μg·ml-1·h和0.892±0.233μg·ml-1.h，AUC0～∞為1.095±0.242μg·ml-1·h和1.085±0.254μg·ml-1·h，羅通定口崩片相對生物利用度F為104.02﹪±8.539﹪。 4生物等效性評價多因素方差分析顯示，試驗制劑羅通定口崩片和參比制劑羅通定片經(jīng)口給藥雙交叉雙周期試驗羅通定主要藥代動力學(xué)參數(shù)AUC、Cmax和t1/2藥物間及周期間

10、無顯著性差異，但個體間存在統(tǒng)計學(xué)差異。進一步雙單側(cè)t檢驗符合生物等效性的統(tǒng)計學(xué)要求，為生物等效制劑。 5臨床觀察志愿者用藥前后血壓、心率改變無顯著性差異；口腔崩解片崩解時間平均約18分鐘，困倦出現(xiàn)時間平均33分鐘；口感良好，無沙碩感，無異味，未見其他全身或局部不良反應(yīng)發(fā)生。 結(jié)論：1本研究所建立的高效液相色普羅通定血濃度測定方法，靈敏，專一，簡單，快速，可用于羅通定藥代動力學(xué)研究和治療藥物檢測。2羅通定口崩片相對生物利用

11、度F為104.02﹪±8.539﹪。其吸收程度(AUC)與普通片無差異，但吸收速度(Tmax)藥物間及個體間存在統(tǒng)計學(xué)差異，口崩片達峰時間明顯早于普通片，符合口崩片迅速崩解、迅速達峰的制劑特點。 3多因素方差分析顯示，試驗制劑和參比制劑經(jīng)口給藥雙交叉雙周期試驗羅通定主要藥代動力學(xué)參數(shù)AUC、Cmax和t1/2藥物間及周期間無顯著性差異，但個體間存在統(tǒng)計學(xué)差異。進一步雙單側(cè)t檢驗符合生物等效性的統(tǒng)計學(xué)要求，為生物等效制劑。兩制劑T