雞ADFP和PLIN基因與脂肪組織生長(zhǎng)發(fā)育關(guān)系的遺傳學(xué)研究.pdf

1、脂肪性狀是優(yōu)質(zhì)雞肉品質(zhì)評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)，此類性狀的發(fā)育會(huì)直接影響其商品性能。因此，有必要開展調(diào)控脂肪性狀發(fā)育的基因的研究。Adipocytedifferentiation-relatedprotein(ADFP)和Perilipin是覆蓋在脂滴表面的磷蛋白，對(duì)人和鼠脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)代謝有重要的調(diào)控作用。由于兩種蛋白參與了糖尿病、肥胖癥和動(dòng)脈粥樣硬化的異常脂質(zhì)代謝，在國(guó)外，ADFP和Perilipin在持續(xù)十七年的時(shí)間中一直是研究的熱點(diǎn)。在人

2、和小鼠上開展ADFP和Perilipin的研究對(duì)深入研究雞脂肪性狀遺傳機(jī)制有很好的借鑒作用。 本研究以地方品種四川山地烏骨雞為試驗(yàn)材料，克隆獲得了雞PAT家族成員ADFP和基因PLIN的全編碼區(qū)序列(1317bp和1554bp)(GenBankaccessionnumbers：EU620700和EU1620701)，并翻譯獲得其氨基酸序列(438aa和515aa)。通過多種生物信息學(xué)分析方法，確定兩條氨基酸序列具有PAT家族的結(jié)

3、構(gòu)特征，是雞PAT家族成員ADFP和PLIN蛋白。 本研究以地方品種四川山地烏骨雞、藏雞和培育優(yōu)質(zhì)雞“大恒”S01系為試驗(yàn)材料，采用SYBRgreenⅠ定量PCR分析ADFP基因和PLIN基因在1日齡和84日齡兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)品種間的表達(dá)差異，同時(shí)分析了四川山地烏骨雞胚胎期(第9天和第15天)、1日齡和84日齡等4個(gè)時(shí)間點(diǎn)ADFP基因和PLIN基因表達(dá)的組織差異，以及胸肌、肝臟、腹脂和皮脂組織中ADFP基因和PLIN基因表達(dá)量的發(fā)育性

4、變化同皮脂厚、肌內(nèi)脂肪含量、活重和冠重等四個(gè)表型性狀累積生長(zhǎng)值之間的關(guān)系。結(jié)果表明，ADFP基因和PLIN基因在雞不同生長(zhǎng)發(fā)育階段都有表達(dá)，并且在不同階段各有優(yōu)勢(shì)表達(dá)組織，同一組織中也有表達(dá)的優(yōu)勢(shì)時(shí)間點(diǎn)；腹脂組織中ADFP基因的發(fā)育性變化與活重和冠重的累積生長(zhǎng)值成顯著正相關(guān)(P＜0.05)，胸肌組織中ADFP基因的發(fā)育性變化與肌內(nèi)脂肪含量的累積生長(zhǎng)值成顯著正相關(guān)(P＜0.05)；腹脂組織中PLIN基因的發(fā)育性變化與皮脂厚的累積生長(zhǎng)值成極

5、顯著地正相關(guān)(P＜0.01)，胸肌組織中PLIN基因的發(fā)育性變化與肌內(nèi)脂肪含量的累積生長(zhǎng)值成極顯著地正相關(guān)(P＜0.01)。這說明，ADFP和PLIN基因表達(dá)量與雞脂肪組織，尤其是肌內(nèi)脂肪含量的發(fā)育緊密相關(guān)。 通過研究四川山地烏骨雞各組織的ADFP和PLIN基因表達(dá)量倍比值的發(fā)育性變化，發(fā)現(xiàn)皮脂和腹脂組織中ADFP和PLIN表達(dá)量比值變化隨機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育呈先升后降的趨勢(shì)。由此推測(cè)，隨著脂肪組織中脂肪細(xì)胞的發(fā)育成熟，ADFP和PL

6、IN基因先后對(duì)雞脂肪組織的代謝發(fā)揮主要調(diào)控作用。 本研究以地方品種四川山地烏骨雞、廣東惠陽胡須雞、封開杏花雞、清遠(yuǎn)麻雞、廣西霞煙雞、四川大恒優(yōu)質(zhì)雞8個(gè)品系、嶺南黃雞矮小型麻羽專門化品系(E2)、嶺南黃雞Ⅱ號(hào)配套系(DC)和引進(jìn)肉雞品種愛拔益加等16個(gè)群體，共430個(gè)個(gè)體為試驗(yàn)材料，采用PCR-SSCP的方法設(shè)計(jì)引物，掃描ADFP和PLIN基因外顯子序列和鄰近內(nèi)含子序列。結(jié)果，在ADFP基因中檢測(cè)到3個(gè)單核苷酸突變位點(diǎn)，分別位于內(nèi)

7、含子4、內(nèi)含子5和外顯子8(第398氨基酸殘基處)。具體為Z染色體33394913位(SNP1)A→T，33395676位(SNP2)C→T，33397903位(SNP3)A→G。與dbSNP數(shù)據(jù)庫的SNP比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)三個(gè)突變位點(diǎn)為新的突變位點(diǎn)。在ADFP基因的三個(gè)突變位點(diǎn)中，等位基因A、C和G依次為SNP1(A/T)、SNP2(C/T)和SNP3(A/G)的優(yōu)勢(shì)等位基因。ADFP基因單突變位點(diǎn)與16個(gè)群體的屠宰性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果顯示，

8、SNP3對(duì)肌內(nèi)脂肪含量的遺傳效應(yīng)達(dá)到顯著水平(P＜0.05)。同時(shí)，SNP1對(duì)全凈膛重、腹脂重和腹脂率的遺傳效應(yīng)達(dá)到顯著水平(P＜0.05)，SNP2對(duì)胸肌重、腹脂重和皮脂厚的遺傳效應(yīng)達(dá)到顯著水平(P＜0.05)。單倍型與16個(gè)群體的屠宰性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果顯示，單倍型組合對(duì)胸肌重、腹脂重和腹脂率的遺傳效應(yīng)達(dá)到顯著水平(P＜0.05)。這說明ADFP基因突變位點(diǎn)與屠宰性狀，尤其是脂肪性狀顯著相關(guān)，該基因可能是影響雞的脂肪性狀的主效基因或與控

9、制這些性狀的QTL連鎖。 在PLIN基因中檢測(cè)到3個(gè)單核苷酸突變位點(diǎn)，分別位于外顯子2(第7氨基酸殘基)和外顯子7(第285氨基酸殘基和第289氨基酸殘基)。具體為10染色體14521351位(SNPl)T→C，14523391位(SNP2)C→T，14523402位(SNP3)G→A。與dbSNP數(shù)據(jù)庫的SNP比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)三個(gè)突變位點(diǎn)為新的突變位點(diǎn)。在PLIN基因的三個(gè)突變位點(diǎn)中，SNP1(T/C)和SNP2(C/T)各基因

10、型和等位基因在16個(gè)群體中隨機(jī)分布，沒有明顯的優(yōu)勢(shì)基因型和等位基因；SNP3(G/A)基因型GG和等位基因G在16個(gè)群體中均為優(yōu)勢(shì)基因型和等位基因。突變位點(diǎn)SNP1和SNP2具有中等的多態(tài)信息含量。單突變位點(diǎn)與16個(gè)群體的屠宰性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果顯示，SNP1、SNP2和SNP3分別對(duì)肌內(nèi)脂肪含量、胸肌重和屠體重有顯著地遺傳效應(yīng)(P＜0.05)。單倍型與16個(gè)群體的屠宰性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果顯示，單倍型組合對(duì)皮脂厚有顯著的遺傳效應(yīng)(P＜0.05)