滋陰藥地黃活性成分梓醇神經保護作用研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一種中樞神經系統(tǒng)退行性疾病,臨床表現為進行性記憶和認知功能障礙.患者發(fā)生最早也最重要的病理改變是基底前腦膽堿能神經元的變性、丟失,膽堿能標志物膽堿乙?；D移酶 (cholineacetyl-transferase,CHAT)活性降低,神經遞質乙酰膽堿 (acetylcholine,ACh)釋放減少,受體功能異常,因此改善膽堿神經元的功能對AD的治療有重要意義.目前臨床對AD的

2、藥物治療主要是使用膽堿酯酶抑制劑和M受體激動劑對癥治療改善輕、中度AD患者癥狀,對重度患者效果甚微,且長期療效差,副作用嚴重,尋找和開發(fā)治療AD的安全有效藥物一直是AD研究的重要方向. 中醫(yī)對AD等記憶障礙性疾病有獨到的見解,認為本病患者多為腎陰虛證,因此滋陰藥在治療AD的方劑中常用,其中知母和地黃最常用到.多年來我們科室對知母抗 AD 活性成分知母皂苷元(sarsasapogenin,ZMS)及其 25 位異構體異菝葜皂苷元

3、(smilagenin,SMI)的神經保護作用及作用機制進行了系統(tǒng)的研究.地黃抗AD的活性成分尚不明確,其活性成分以環(huán)烯醚萜類為主,而梓醇在地黃環(huán)烯醚萜類中含量最高,是中國藥典指定的地黃質量鑒定指標.近年來梓醇的神經保護作用研究較多. 本課題在動物模型實驗的基礎上,從細胞水平進一步觀察了梓醇的膽堿神經保護作用,并對其作用機制進行了初步探討.放射配基結合分析研究結果表明,梓醇終濃度1×10<'-5>mol/l、1×10<'-4>

4、mol/l能上調衰老CHOm2細胞和L-Glu損傷PC12細胞下降的M受體密度,卻不影響膽堿酯酶活性,也不與M受體位點結合；對Aβ<,25-35>損傷神經元樣PC12細胞制作的AD細胞模型,MTT分析發(fā)現梓醇能增加其存活率,免疫細胞化學和放射酶分析測定ChAT活性、RT-PCR分析ChAT mRNA表達等方法檢測結果顯示梓醇對模型細胞降低的ChAT活性及ChAT mRNA表達有改善作用,終濃度達1×10<'-4>mol/1時神經保護作用

5、顯著.提前1h加入神經營養(yǎng)因子高親和力受體trk的特異性阻斷劑K252a干預梓醇的作用,發(fā)現其膽堿神經保護作用減弱,但沒有完全消失,說明梓醇的作用部分通過神經營養(yǎng)因子途徑實現；針對Ap<,25-35>毒性作用以誘導細胞凋亡為主,而梓醇對其毒性有對抗作用,進一步的實驗用TUNEL法測細胞凋亡率、RT-PCR測凋亡相關因子Bax、Bcl-2的mRNA表達,結果發(fā)現梓醇1×10<'-4>mol/l有明顯抗Aβ<,25-35>誘導PC12細胞凋

6、亡作用,提示梓醇膽堿神經保護作用機制與其抗細胞凋亡作用有關. 上述實驗結果表明梓醇具有明顯膽堿神經保護作用,其與目前臨床所用藥物不同之處在于,既不是膽堿酯酶抑制劑,又不是M受體激動劑或阻斷劑,很可能成為一類新的抗AD藥物.從研究結果來看,梓醇作用較弱,終濃度達到1×10<'-4>mol/l才對細胞有顯著的改善作用,且臨床用藥以熟地黃滋陰作用更強,而熟地黃中梓醇含量明顯減少,有些梓醇結構類似物含量卻明顯增加,推測某些梓醇結構類似物