蝎子草抗菌活性成分研究.pdf

1、蝎子草屬(Girardinia suborbiculata)植物，為蕁麻科(Urticaceae)一年生、多年生草本或半灌木植物。在我國(guó)廣泛分布于陜西、甘肅、湖南、四川，資源豐富。蝎子草，別名紅藿毛草、火麻草，是民間常用藥蕁麻的主要來(lái)源之一。國(guó)內(nèi)外關(guān)于蝎子草的研究較少，主要集中在藥理方面，民間主要用來(lái)治療風(fēng)濕痹痛、外傷出血、潰瘍、肢麻等，目前未見有對(duì)蝎子草抗菌活性成分的研究報(bào)道。
　　 本課題以蝎子草為研究對(duì)象，采用對(duì)蝎子草抗菌

2、活性成分進(jìn)行生物活性追蹤，應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段，以期獲得具有抗菌活性的化學(xué)物質(zhì)。同時(shí)，對(duì)蝎子草的抗菌機(jī)制進(jìn)行了初步探討。
　　 1.蝎子草抗菌活性研究
　　 (1)打孔瓊脂擴(kuò)散法表明：蝎子草醇提浸膏對(duì)供試細(xì)菌中革蘭氏陽(yáng)性菌(金黃色葡萄球菌、藤黃八疊球菌)的抑菌效果強(qiáng)于革蘭氏陰性菌(大腸桿菌、沙門氏菌)，其中對(duì)金黃葡萄球菌的抑菌效果最好，對(duì)大腸桿菌的抑菌效果最差，說(shuō)明蝎子草醇提浸膏對(duì)供試細(xì)菌具有一定的選擇性，對(duì)供試細(xì)菌中革

3、蘭氏陽(yáng)性菌具有較好的抑菌效果，對(duì)革蘭氏陰性菌具有一定的選擇性。
　　 (2)蝎子草醇提浸膏MIC的測(cè)定結(jié)果顯示，其對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用最強(qiáng)，蝎子草醇提浸膏MIC濃度為100 mg/mL。因此，確定將金黃色葡萄球菌作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的指示菌。
　　 (3)蝎子草醇提浸膏萃取物的抗菌活性測(cè)定結(jié)果顯示，各萃取部分中均具有一定抗菌活性。其中抗菌活性最大的是乙酸乙酯層，接下來(lái)是正丁醇層、石油醚層，而水層幾乎沒(méi)有抗菌活性。因此，后續(xù)

4、實(shí)驗(yàn)將對(duì)乙酸乙酯部分進(jìn)行進(jìn)一步分離純化。
　　 2.蝎子草抗菌活性成分的分離
　　 本文對(duì)抗菌活性成分進(jìn)行生物活性追蹤，對(duì)蝎子草乙酸乙酯部分進(jìn)行了分離純化，采用硅膠柱色譜、制備型TLC、高效液相色譜和高速逆流色譜等方法，從蝎子草的乙酸乙酯中分離得到2個(gè)單體化合物，并通過(guò)波譜學(xué)方法(1H-NMR、13C-NMR、MS)對(duì)這些化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，確定它們結(jié)構(gòu)分別為：組分Ⅰ是β-谷甾醇，組分Ⅱ是對(duì)羥基肉桂酸乙酯。它們對(duì)金黃色

5、葡萄球菌的最低抑菌濃度分別為3.4 mg/mL，2.0 mg/mL。其中，對(duì)羥基肉桂酸乙酯為首次從該屬中分離得到，且首次發(fā)現(xiàn)其具有抗菌活性。
　　 3.蝎子草抗菌機(jī)制的初步探討
　　 (1)對(duì)金黃色葡萄球菌菌體生長(zhǎng)曲線的影響：通過(guò)設(shè)立對(duì)照組和蝎子草醇提浸膏組來(lái)觀察金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)狀況。結(jié)果顯示，蝎子草醇提浸膏組中，金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)受到了明顯的抑制，而對(duì)照組迅速進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，表明了蝎子草醇提浸膏能抑制金黃色葡萄球

6、菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌體分裂生長(zhǎng)。
　　 (2)對(duì)菌體細(xì)胞可溶性蛋白表達(dá)的影響：SDS-PAGE電泳的結(jié)果可知，蝎子草醇提浸膏作用于金黃色葡萄球菌后，可溶性蛋白條帶明顯減少，而對(duì)照組中的金黃色葡萄球菌可溶性蛋白在逐漸增加，條帶也越來(lái)越深，表明了蝎子草醇提浸膏對(duì)金黃色葡萄球菌的可溶性蛋白表達(dá)具有明顯抑制作用。
　　 (3)對(duì)金黃色葡萄球菌核酸的影響：通過(guò)DAPI染色，在倒置熒光顯微鏡和熒光分光光度計(jì)的觀察和分析表明，蝎子草醇提浸