兒童B系急性淋巴細(xì)胞性白血病CD133-2的生物學(xué)特性及其分子機(jī)制初步研究.pdf

1、目的:探究CD133-2在兒童B系急性淋巴細(xì)胞白血病(B-ALL)作為干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)的意義及其作用的分子機(jī)制,從而明確CD133-2是否為兒童B-ALL的白血病干細(xì)胞(LSC)標(biāo)志,也為進(jìn)一步研究兒童B-ALL的分子發(fā)病機(jī)制奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:1、流式細(xì)胞術(shù)檢測初診和復(fù)發(fā)兒童B-ALL(共38例,包含初診34例,復(fù)發(fā)4例)骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BM-MNCs)CD133-2的表達(dá)(IgG1-PE為同型對照),并采集5例CD133

2、-2陽性表達(dá)(比例≥20％)的B-ALL患兒(初診4例,復(fù)發(fā)1例)BM-MNCs,免疫磁珠分選法(MACS)分選純化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四組亞群細(xì)胞,體外甲基纖維素半固體集落培養(yǎng)(包含SCF、GM-CSF、G-CSF、IL-3、IL-6、EPO等成分),觀察各亞群集落形成能力,并對培養(yǎng)后形成的集落細(xì)胞瑞氏-姬薩姆染色做形態(tài)學(xué)鑒定。
　　2、

3、6例CD133-2表達(dá)陽性的B-ALL(初診4例,復(fù)發(fā)2例)患兒BM-MNCs中MACS分選純化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四組亞群細(xì)胞,以CD133-2+CD19-亞群細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,CD133-2-CD19+亞群細(xì)胞為對照組,采用Real-time PCR法和基因芯片試劑盒,分析與TGF-β信號通路相關(guān)的84個(gè)基因分子在以上兩群細(xì)胞中的表達(dá)差異。

4、>　　結(jié)果:1、流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示:38例兒童B-ALL中, CD133-2的陽性表達(dá)率為60.5％(比例≥20％為表達(dá)陽性)。其中5例兒童B-ALL的BM-MNCs經(jīng)MACS分選純化后,體外甲基纖維素半固體集落培養(yǎng)14天,CD133-2+CD19-細(xì)胞群在第5天出現(xiàn)紅系集落,第7天后出現(xiàn)混合集落,第10天時(shí)集落較第5天增長10倍,增長速度明顯加快,第12天時(shí)集落狀態(tài)良好,第14天后集落未再增加。對生長狀態(tài)良好的集落細(xì)胞瑞氏-姬薩姆

5、染色,CD133-2+CD19-形成的集落中可見紅系、粒系、巨噬和單核系細(xì)胞。其他亞群形成集落不明顯。比較各亞群細(xì)胞集落形成方面差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。
　　2、Real-time PCR檢測結(jié)果顯示:初診兒童B-ALL中CD133-2+CD19-細(xì)胞亞群與TGFβ信號通路下游DCN、IGFBP3、THBS1、Smad6基因的上調(diào)有關(guān),與SERPINE1基因的下調(diào)有關(guān);復(fù)發(fā)組中CD133-2+CD19-細(xì)胞亞群

6、與TGFβ信號通路下游TGFβ1、LTBP1基因的上調(diào)有關(guān),與IGFBP3、 SERPINE1基因的下調(diào)有關(guān)。
　　結(jié)論:1、體外半固體集落培養(yǎng)表明兒童B-ALL中CD133-2+CD19-細(xì)胞亞群具有多向分化能力,結(jié)合我們前期體外懸浮培養(yǎng)結(jié)果提示其具有長期增殖能力,說明此亞群具備了LSC的特性,由此CD133-2+CD19-亞群可能是兒童B-ALL來源的LSC免疫表型標(biāo)志。
　　2、DCN、IGFBP3、THBS1、Sma