兒童急性B系淋巴細胞性白血病有效抗原組合及其臨床意義研究.pdf

1、第一部分：
　　 兒童急性B系淋巴細胞性白血病有效抗原組合及其臨床意義研究。
　　 目的：
　　 探討使用流式細胞術(shù)（FCM）檢測兒童急性B淋巴細胞白血病(B acute lymphoblastic leukemia，B-ALL)微小殘留?。∕inimal Residual Disease，MRD）時各個有效抗原組合的發(fā)生頻率及各組合分別與臨床預(yù)后相關(guān)因素的關(guān)系。
　　 方法：
　　 自2002年

2、1月1日起，我院開始使用流式細胞術(shù)（FCM）檢測兒童急性B淋巴細胞白血病(B acute lymphoblastic leukemia，B-ALL)微小殘留病（Minimal Residual Disease，MRD）。本研究回顧性的分析2002年1月1日起至2008年5月31日期間，對327例我院初診的B-ALL患兒骨髓標本進行MRD篩選，其中289例有適合MRD檢測的抗原組合作為有效標記。的患兒骨髓標本，進行每組4個抗原，共9組抗原

3、組合檢測，統(tǒng)計各有效抗原組合的發(fā)生頻率并與國外報告進行比較，分析各抗原組合在臨床預(yù)后因素分組中的分布差異。
　　 結(jié)果：
　　 （1）327例初發(fā)B-ALL患兒中，289例存在至少1組可檢測的有效抗原組合，其覆蓋率為88.4％。（2）不同有效抗原組合的發(fā)生頻率不同，以TdT/CD10/CD34/CD19組合頻率最高，為70.59％。中國患兒有效抗原組合與國外報道有差異。（3）部分有效抗體組合與臨床表型以及治療反應(yīng)相關(guān)，C

4、D38/CD10/CD34/CD19在復(fù)發(fā)組病例中高表達(P=0.045)。 CD66c/CD10/CD34/CD19 在BCR/ABL 陽性組（P=0.037）和復(fù)發(fā)組(P=0.047)中高表達。 TdT/CD10/CD34/CD19則更高表達于 MLL-AF4陰性組 (P=0.005)和強的松良好效應(yīng)組(P=0.002)。CD58/CD10/CD34/CD19 與低復(fù)發(fā)率顯著相關(guān) (P=0.032).
　　 結(jié)論：
　

5、　 （1）所選9組抗原組合在中國B-ALL兒童中的覆蓋率較高，可達88％以上。不同有效抗原組合的發(fā)生頻率不同，在中國患兒中的表達與國外報道有差異，其中CD21/CD10/CD34/CD19、CD22/CD10/CD34/CD19、CD10/CD56/CD34/CD19、TdT/Cu/CD34/CD19組合的表達率略低于國外報道，TdT/CD10/CD34/CD19的表達高于國外報道。而CD38/CD10/CD34/CD19、CD45/

6、CD19/CD10/CD34、CD58/CD10/CD34/CD19、CD66c/CD10/CD34/CD19的表達率與國外報道的發(fā)生頻率范圍基本一致。（2）TdT/CD10/CD34/CD19有高表達頻率，可作為簡化的MRD檢測目標組合。（3）發(fā)生頻率較高的4個抗體組合CD38/CD10/CD34/CD19、CD45/CD10/CD34/CD19、CD58/CD10/CD34/CD19和TdT/CD10/CD34/CD19可以協(xié)助無初

7、發(fā)MRD記錄的患兒的療效評估和指導(dǎo)治療強度調(diào)整。（4）部分有效抗體組合對臨床預(yù)后產(chǎn)生影響，CD58/CD10/CD34/CD19和TdT/CD10/CD34/CD19與良好預(yù)后相關(guān)，CD66c/CD10/CD34/CD19和CD38/CD10/CD34/CD19與不良預(yù)后相關(guān)。該結(jié)果可能為B-ALL的個體化治療提供參考依據(jù)。
　　 第二部分：
　　 高分辨熔解曲線法檢測FLT3的方法建立及臨床意義的初步研究
　　

8、 目的：
　　 構(gòu)建FLT3質(zhì)粒及建立熒光實時定量PCR聚合酶鏈式反應(yīng)（RQ-PCR）高分辨熔解曲線（HRM）檢測兒童急性髓細胞白血病（AML）骨髓樣本FLT3基因的實驗方法。初步研究FLT3基因在兒童急性髓細胞白血病中的發(fā)生頻率及臨床意義。
　　 方法：
　　 參考國內(nèi)外文獻，設(shè)計合成FLT3-ITD基因引物，利用分子克隆的方法構(gòu)建含有目的基因FLT3-ITD突變型和野生型片段的質(zhì)粒，并以此作為陽性和陰性對照檢

9、測兒童急性髓細胞白血病的骨髓樣本。通過實時熒光定量PCR高分辨熔解曲線分析的方法，對質(zhì)粒和臨床樣本進行檢測，根據(jù)該基因野生型和突變型PCR擴增產(chǎn)物解鏈溫度的差異，對樣本和質(zhì)粒的不同基因型進行區(qū)分。實驗結(jié)果應(yīng)用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料采用卡方檢驗，計量資料采用方差分析。
　　 結(jié)果：
　　 70例我院明確診斷并接受治療的初發(fā)急性髓細胞性白血病患兒的骨髓標本中，有23例標本存在FLT3-ITD 突變，突

10、變率為32.86％。 FLT3-ITD突變組與野生組之間的起病臨床因素如年齡、性別比例、初發(fā)時骨髓原始細胞比例、白細胞計數(shù)、血小板計數(shù)、是否存在髓外浸潤、LDH水平、SF水平間無顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。FLT3-ITD突變的發(fā)生率M2>M3>M4/M5>M1/M7>M6,該突變在7種常見兒童急性髓細胞白血病分型中的分布無顯著的統(tǒng)計學(xué)差異，P=0.061.盡管FLT3-ITD突變組的一療程緩解率、EFS和OS均低于FLT3-ITD野生組，但兩者

11、的差異未達到統(tǒng)計學(xué)標準，P>0.05.
　　 結(jié)論：
　　 本實驗構(gòu)建的包含F(xiàn)LT3-ITD基因突變型和野生型的質(zhì)粒，作為RQ-PCR的陽性和陰性對照，具有臨床應(yīng)用意義，為高分辨熔解曲線的分析提供了基礎(chǔ)條件。建立了熒光實時定量PCR高分辨熔解曲線分析檢測兒童急性髓細胞性白血病初發(fā)患兒FLT3-ITD突變的方法，可能為進一步檢測微小殘留病變提供參考依據(jù)。FLT3-ITD突變型與野生型患兒的臨床預(yù)后指標之間的差異未達到統(tǒng)計學(xué)