鉤端螺旋體抗原表位預(yù)測(cè)及其重組、表達(dá)的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、鉤端螺旋體(Leptospira)是鉤端螺旋體病(Leptospirosis)的病原微生物.它的致病機(jī)制被認(rèn)為與其外膜蛋白(OMPs)有關(guān).研究表明,外膜蛋白LipL32和OmpL1是其優(yōu)勢(shì)抗原.本研究通過(guò)計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)程序ProPred和ANTIGENIC預(yù)測(cè)到LipL32和OmpL1的各2個(gè)既具有MHC結(jié)合肽特性又有B細(xì)胞表位(Bcell epitope)特征的肽段,作為生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的候選肽段.應(yīng)用PCR技術(shù)合成包含以上候選肽段的3種重組

2、表位基因片段.克隆PCR產(chǎn)物,構(gòu)建重組質(zhì)粒,測(cè)序結(jié)果顯示,重組表位基因序列中沒(méi)有出現(xiàn)移碼和堿基置換.進(jìn)一步將重組表位基因克隆到pGEX-5X載體,獲得表達(dá)質(zhì)粒,在BL21中誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白.3種融合蛋白均獲得高效表達(dá).經(jīng)優(yōu)化誘導(dǎo)條件,用GSTrapFF 1ml純化柱純化獲得2種高純度的融合蛋白.用MAT法檢測(cè)經(jīng)純化的融合蛋白免疫的BALB/c小鼠的抗血清,結(jié)果顯示,2種融合蛋白產(chǎn)生的抗體滴度分別為1/25和1/75.79.本研究預(yù)測(cè)了2

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