銀杏葉鼻用原位凝膠劑的研究.pdf

1、銀杏葉提取物（Ginkgo Biloba extract，GBE）是以中藥銀杏葉為原料提取的有效成分。主要成分為總黃酮苷，萜類內酯。其中槲皮素、山柰素、異鼠李素是黃酮苷的三種主要苷元，對心腦血管疾病，高血脂，高血壓，清除氧自由基具有顯著的療效；萜類內酯包括銀杏內酯 A、B、C、M、J、和白果內酯，為強效血小板活化因子（PAF）拮抗劑，能降低血黏度，改善血液流動性[1,2]。近來研究表明，GBE可改善認知功能減退及治療老年性癡呆。

2、　　老年癡呆（senile dementia，SD）[3]是指老年期出現(xiàn)的已獲得的智能在本質上出現(xiàn)持續(xù)的損害，也就是由器質性腦損害導致的基本上不可逆的智能缺失和社會適應能力降低。其發(fā)病機制非常復雜，可能與膽堿能、單胺能、神經肽能等多種遞質和調制物的功能障礙有關。
　　GBE目前臨床上給藥途徑為靜脈和口服制劑。口服給藥雖然方便，但存在嚴重的首過效應，生物利用度低。皮下注射疼痛且不宜自主用藥。因此，研制一種有效，便捷的給藥途徑是提高腦

3、內濃度、增強治療作用的一個選擇。
　　鼻腔給藥是近年來研究最多的給藥途徑之一，不僅具有藥物吸收迅速，無首過效應，給藥方便等優(yōu)點，而且還具有向腦內遞藥的特性，因而有望提高 GBE的腦內濃度，增強對老年癡呆的防治效果。中藥鼻腔給藥的現(xiàn)代劑型以滴鼻劑為主，但由于鼻腔粘液分泌及纖毛運動，使藥物在鼻腔中滯留時間短，生物利用度降低。因此，本課題擬將 GBE制成鼻腔原位凝膠劑，考察離體黏膜吸收作用以及評價其給藥后的體內藥物動力學性質，為 GBE

4、臨床應用提供有效便捷的新制劑。
　　主要研究內容：
　　1、GBE體外分析方法的建立
　　建立HPLC-UV法測定GBE中TFG的含量。Agilent C18色譜柱，流動相為甲醇：0.4％磷酸溶液（50：50，v/v）；流速：0.8 mL·min-1；檢測波長：360 nm；柱溫：30℃；進樣量：20μL。
　　建立HPLC-ELSD法測定GBE中萜內酯含量。依利特C18色譜柱，流動相：甲醇：四氫呋喃：水（25：

5、10：65，v/v）；流速：0.6 mL·min-1；載氣(N2)流速：2.7 L·min-1；柱溫：35℃；漂移管溫度：115℃。
　　2、銀杏葉鼻用原位凝膠劑的處方篩選
　　分別以粘度粘附力為指標，carbopol934、HPMC為載體制備原位凝膠，結果以0.8%carbopol934和1.5%HPMC為最佳。銀杏葉提取物在水中屬于極微溶解。本研究采用相溶解度法，考察GBE在不同體積分數(shù)的HP-β-CD下相溶解度。其余輔

6、料以鼻纖毛毒性小，不影響藥物穩(wěn)定性為原則確定處方。
　　3、銀杏葉鼻用原位凝膠劑的制備工藝研究
　　室溫下取銀杏葉提取物4.5 g，加入已用重蒸餾水溶解的HP-β-CD溶液，不斷攪拌溶解，加入處方劑量的其他組分，攪拌使溶解，加入HPMC1.5 g，使之水化溶脹，再將卡波姆9340.8 g溶解其中攪拌約24 h，使之充分溶脹。用1 mol·L-1 NaOH溶液調節(jié)pH至4.3。
　　4、促吸收劑對GBE-ISG吸收的影響

7、
　　采用離體羊鼻黏膜，使用 Franz擴散池，選擇1%吐溫-80、0.5%冰片、1%氮酮，而后分別進行鼻黏膜吸收試驗。結果，3種促滲劑黏膜滲透速率為：1%氮酮＞1%吐溫＞0.5%冰片。隨氮酮濃度的增大，藥物黏膜吸收逐漸增加，吸收過程符合Weibull動力學方程。
　　5、銀杏葉鼻用原位凝膠劑的安全性評價
　　采用在體蟾蜍上顎模型考察銀杏葉鼻用凝膠劑及輔料對纖毛運動的影響，從而評價制劑的鼻黏膜毒性。結果表明，銀杏葉鼻用

8、凝膠劑和輔料均無不良影響。
　　6、銀杏葉鼻用原位凝膠劑的初步穩(wěn)定性考察
　　制備3批GBE-ISG制劑，進行初步穩(wěn)定性試驗（耐熱試驗、光照試驗、高濕度試驗），初步確定本品可在室溫下保存。
　　7、銀杏葉原位凝膠在兔體內的藥代動力學研究
　　建立了HPLC法測定槲皮素血藥濃度。采用Agilent C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相為甲醇-0.4%磷酸溶液（60：40，v/v）；檢測波長為3

9、68 nm；進樣量為20μL。經方法學評價，提取回收率、方法回收率和精密度均符合生物樣品測定要求。測定了6只家兔口服銀杏葉片和鼻腔給藥GBE-ISG后血漿中槲皮素的濃度，計算藥代動力學參數(shù)。結果，銀杏葉鼻用原位凝膠劑和片劑的體內過程均符合單室模型，銀杏葉鼻用原位凝膠劑的Tmax約為1.22 h，Cmax約為779.30μg·L-1；而對照組銀杏葉片劑的Tmax約為1.92 h，Cmax約為452.79μg·L-1，其相對生物利用度為77