哮喘Th1-Th2細胞偏移及BCG干預(yù)的實驗研究.pdf

1、目的：通過觀察哮喘小鼠肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid BALF)、脾細胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ和IL-4的變化，計算IFN-γ/IL-4比值，以了解哮喘發(fā)病過程中Th1/Th2比例的動態(tài)變化；通過觀察哮喘小鼠肺組織中T-bet(T-box expressed in T cell)蛋白的表達情況，以了解哮喘發(fā)病過程中T-bet的動態(tài)變化。同時觀察減毒活菌卡介苗(BacillusCalmette-Gue

2、rin BCG)對Th1/Th2、T-bet的影響。 方法：健康昆明小鼠(雄性、3周齡、體重18-22克)隨機分成三組，每組20只。每組又分成四個小組，每小組5只。1)哮喘組：以0.01％卵白蛋白(Ovalbumin OVA)0.1ml與佐劑2％氫氧化鋁[AL(OH)<,3>]0.1ml腹腔注射致敏，1％OVA霧化吸入激發(fā)建立小鼠哮喘模型。2)BCG干預(yù)組(以下簡稱干預(yù)組)：OVA致敏/激發(fā)方法、劑量、時間同哮喘組，在OVA致敏

3、前每只小鼠皮內(nèi)注射BCG 0.025mg。3)對照組：以生理鹽水代替卵白蛋白，進行腹腔注射和霧化吸入，方法、劑量、時間同哮喘組。三組的各小組分別于實驗第0天、15天、23天、29天時采集標本，ELISA法檢測小鼠肺泡灌洗液(BALF)中IFN-γ、IL-4的水平，并計算IFN-γ/IL-4比值。取小鼠脾單個核細胞進行細胞培養(yǎng)，ELISA法檢測脾單個核細胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ、IL-4的水平，免疫印跡法(Western Blot)檢測小

4、鼠肺組織中T-bet蛋白的表達情況。 結(jié)果： 1．各組小鼠肺泡灌洗液、脾細胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ隨時間的變化： 哮喘組在致敏后IFN-γ明顯減少，初次激發(fā)后，IFN-γ明顯減少，多次激發(fā)后，IFN-γ進一步減少，但趨勢放緩;干預(yù)組在致敏后、初次、多次激發(fā)后，IFN-γ均較哮喘組增多，但仍低于對照組。 2．各組小鼠肺泡灌洗液、脾細胞培養(yǎng)上清液中IL-4隨時間的變化： 哮喘組在致敏后IL-4明顯增多

5、，初次激發(fā)后，IL-4水平進一步增多，多次激發(fā)后，IL-4繼續(xù)增多，趨勢不減；干預(yù)組在致敏后、初次、多次激發(fā)后，IL-4水平均較哮喘組減少，但仍高于對照組。 3．各組小鼠肺泡灌洗液、脾細胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ/IL-4比值隨時間的變化： 哮喘組在致敏后，IFN-γ/IL-4比值較對照組明顯降低，初次激發(fā)后，IFN-γ/IL-4比值進一步降低，多次激發(fā)后，IFN-γ/IL-4比值繼續(xù)降低；干預(yù)組在致敏后，IFN-γ/IL

6、-4比值較哮喘組升高，與對照組相比，無顯著性差異，初次、多次激發(fā)后，IFN-γ/IL-4比值均較哮喘組升高，但仍低于對照組。 4．各組小鼠肺組織中。T-bet蛋白的表達情況： 哮喘組T-bet蛋白表達量在致敏后明顯減少，初次、多次激發(fā)后，T-bet蛋白表達量亦減少，但動態(tài)觀察哮喘組T-bet蛋白的表達情況，無顯著性差異；干預(yù)組T-bet蛋白表達量在致敏后、初次激發(fā)后較哮喘組增多，與對照組比較，無顯著性差異，多次激發(fā)后，T

7、-bet蛋白表達量較哮喘組增多，但仍低于對照組。 結(jié)論： 1．OVA致敏后，Th1/Th2比例發(fā)生偏移。OVA激發(fā)后，Th1/Th2偏移進一步加劇。致敏前予BCG干預(yù)，不僅可以糾正致敏后的Th1/Th2偏移，而且能部分糾正氣道激發(fā)后的Th1/Th2偏移。 2．OVA致敏后T-bet蛋白表達減少，OVA．激發(fā)后，T-bet蛋白表達量亦減少，但動態(tài)觀察T-bet蛋白的表達情況，無顯著性差異。致敏前予BGG干預(yù)，不僅可