轉(zhuǎn)錄因子T-bet-GATA-3的比率評價(jià)哮喘患者Th1-Th2失衡及CpGODN干預(yù)機(jī)制的研究.pdf

1、目的： Th細(xì)胞可以分化成Th1、Th2兩種細(xì)胞亞群，每種細(xì)胞亞群均有特異的功能和細(xì)胞因子。IFN-γ是Th1細(xì)胞的特征性細(xì)胞因子，IL-4是Th2細(xì)胞相應(yīng)的特征性的細(xì)胞因子，另外Th2細(xì)胞還分泌IL-5、IL-6、IL-9、IL-13，但不生成IFN-γ。對于不同的免疫刺激或細(xì)胞因子，這兩種Th細(xì)胞可增高并形成免疫調(diào)控環(huán)路，即Th1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子可抑制Th2細(xì)胞的活性，反之亦然。這種調(diào)控環(huán)路的破壞可能是引起哮喘的關(guān)鍵所在，

2、有足夠的證據(jù)表明，IL-4、IL-5及IL-13的釋放增多和IFN-γ的釋放減少，反映出哮喘發(fā)病機(jī)制中的Th1/Th2細(xì)胞失衡學(xué)說。最新的研究證實(shí)，新生Th細(xì)胞分別在IL-12和IL-4誘導(dǎo)下，分化為Th1和Th2細(xì)胞的過程中，相應(yīng)地受到轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3的調(diào)節(jié)。CpGODN為含有非甲基化胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸(CpG)結(jié)構(gòu)的寡聚脫氧核苷酸，能夠誘導(dǎo)Th1型免疫反應(yīng)并抑制Th2型免疫應(yīng)答。本研究擬探討哮喘患者PBMCs中T-

3、bet/GATA-3的比率與Th1/Th2細(xì)胞失衡的關(guān)系，并觀察CpGODN體外干預(yù)后T-bet/GATA-3比率的變化及其對Th1/Th2細(xì)胞平衡的調(diào)節(jié)作用。 方法： 第一部分：抽取30例發(fā)作期哮喘患者(哮喘組)、20例慢性阻塞性肺病患者(COPD組)及20例正常人(對照組)外周靜脈血6ml，各加EDTA0.8ml抗凝，離心分離出血漿凍存待測，同時(shí)按密度梯度離心法分離PBMCs。采用RT-PCR法測定各組PBMCs中T

4、-betmRNA和GATA-3mRNA的表達(dá)強(qiáng)度，ELISA法測定血漿中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的水平。 第二部分：抽取20例發(fā)作期哮喘患者外周靜脈血10ml，各加EDTA1.2ml抗凝，按密度梯度離心法分離出的PBMCs平分為兩部分，一份加入CpGODN和PHA(CpG組)，一份僅加入PHA(空白組)，培養(yǎng)48h后分別收集上清液和細(xì)胞沉淀。采用RT-PCR法測定細(xì)胞沉淀中T-betmRNA和GATA-3mRN

5、A的表達(dá)強(qiáng)度，ELISA法測定上清液中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的水平。 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。樣本間均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)，變量間的關(guān)系采用直線相關(guān)分析。P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.哮喘組PBMCs中T-betmRNA的表達(dá)強(qiáng)度較COPD組及對照組顯著減弱(P＜0.05)，而GATA-3mRNA的表達(dá)強(qiáng)度較其他兩組顯

6、著增強(qiáng)(P＜0.05)。 2.哮喘組血漿中IL-4、IL-5和IL-13的水平分別較COPD組及對照組顯著增高(P＜0.05)；IFN-γ的水平較COPD組顯著降低(P＜0.05)。 3.COPD組血漿中IFN-γ的水平較哮喘組和對照組顯著增高(P＜0.05)，IL-13的水平較其他兩組顯著降低(P＜0.05)。 4.哮喘組T-bet/GATA-3的比率較COPD組及對照組顯著降低(P＜0.05)。 5.

7、T-betmRNA的表達(dá)強(qiáng)度與IFN-γ的水平成正相關(guān)(r=0.675，P＜0.05)，與IL-4、IL-5和IL-13的水平成負(fù)相關(guān)(r=-0.780，r=-0.664，r=-0.546，P＜0.05)。 6.GATA-3mRNA的表達(dá)強(qiáng)度與IFN-γ的水平成負(fù)相關(guān)(r=-0.446，P＜0.05)，與IL-4、IL-5和IL-13的水平成正相關(guān)(r=0.518，r=0.393，r=0.350，P＜0.05)。 7.T

8、-bet/GATA-3的比率與IFN-γ的水平成正相關(guān)(r=0.833，P＜0.05)，與IL-4、IL-5和IL-13的水平成負(fù)相關(guān)(r=-0.779、r=-0.631，r=-0.584，P＜0.05)。 8.CpG組上清液中IL-4、IL-5和IL-13的水平分別較空白組顯著降低(P＜0.05)，IFN-γ的水平較空白組顯著增高(P＜0.05)。 9.CpG組細(xì)胞沉淀中T-betmRNA的表達(dá)強(qiáng)度較空白組顯著增強(qiáng)(P

9、＜0.05)，GATA-3mRNA的表達(dá)強(qiáng)度顯著減弱(P＜0.05)；T-bet/GATA-3的比率較空白組顯著增高(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.哮喘患者血漿中IFN-γ的水平較COPD患者降低，IL-4、IL-5和IL-13的水平較COPD患者增高，反映出哮喘發(fā)病機(jī)制中的一種學(xué)說，即Th1/Th2失衡學(xué)說，Th2細(xì)胞的優(yōu)勢表達(dá)導(dǎo)致哮喘的發(fā)生。 2.哮喘患者T-betmRNA的表達(dá)強(qiáng)度較COPD患者及正常人減弱

10、，與IFN-γ的水平成正相關(guān)且與IL-4、IL-5和IL-13的水平成負(fù)相關(guān)；GATA-3mRNA的表達(dá)強(qiáng)度較COPD患者及正常人增強(qiáng)，與IFN-γ的水平成負(fù)相關(guān)且與IL-4、IL-5和IL-13的水平成正相關(guān)。轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3分別是Th1和Th2細(xì)胞因子釋放的良好指標(biāo)，是哮喘發(fā)病機(jī)制中的上游調(diào)控因素。 3.T-bet/GATA-3的比率與IFN-γ的水平成正相關(guān)，與IL-4、IL-5和IL-13的水平成負(fù)相關(guān)，

11、且較T-betmRNA及GATA-3mRNA表達(dá)強(qiáng)度分別與細(xì)胞因子的相關(guān)性更為密切，提示T-bet/GATA-3的比率可以作為評價(jià)Th1/Th2細(xì)胞失衡更準(zhǔn)確的指標(biāo)。T-bet/GATA-3比率的失衡是哮喘發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。如果通過調(diào)節(jié)T-bet/GATA-3的比率來逆轉(zhuǎn)Th1/Th2細(xì)胞失衡，能在一個(gè)較高的水平上對產(chǎn)生炎性因子的總體環(huán)節(jié)進(jìn)行控制，更有效的控制哮喘。 4.CpGODN可以通過上調(diào)T-bet的表達(dá)同時(shí)下調(diào)GATA