慢性蕁麻疹患者轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3失衡表達的研究.pdf

1、目的：蕁麻疹是皮膚科常見的過敏性疾病，特征性表現(xiàn)為皮膚粘膜反復(fù)發(fā)生風(fēng)團伴劇烈瘙癢。病程超過6-8周的為慢性蕁麻疹，臨床表現(xiàn)遷延難愈，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，甚至可發(fā)生喉頭水腫或休克危及患者生命。其具體發(fā)病機制尚不完全清楚。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，慢性蕁麻疹患者存在IFN-γ低表達，IL-4高表達，提示慢性蕁麻疹可能存在TH亞群失衡。T輔助細胞(Th細胞)可極化為Th1和Th2兩個功能性亞群。Th1分泌干擾素-γ (interferon-γ，I

2、FN-γ)、白細胞介素(inteleukine，IL)-12等細胞因子，主要參與細胞免疫。Th2分泌IL-4、IL-5、IL-13等細胞因子，主要參與體液免疫。Th1/Th2極化是免疫應(yīng)答中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，生理狀態(tài)下維持著動態(tài)平衡，當(dāng)Th1/Th2極化異?；蛉毕輹r可導(dǎo)致疾病。T細胞表達的T盒(T box expressedin T cells，T-bet)是2000年發(fā)現(xiàn)的一個重要的Th1轉(zhuǎn)錄因子，選擇性在Th1譜系細胞中表達。T-bet不

3、僅可轉(zhuǎn)錄激活I(lǐng)FN-γ基因，誘導(dǎo)內(nèi)源性IFN-γ的生成和IFN-γ等位基因的染色質(zhì)重排，導(dǎo)致IFN-γ顯著表達，而且在促進Th1分化同時抑制IL-4、IL-5等Th2型細胞因子生成。GATA連接蛋白-3(GATA binding protein-3，GATA-3)是鋅指結(jié)構(gòu)家族成員的轉(zhuǎn)錄因子之一，是Th2細胞特異的轉(zhuǎn)錄因子。不僅是所有關(guān)鍵性Th2型細胞因子轉(zhuǎn)錄所必需而且能極化已極化的Th1細胞。因此T-bet和GATA-3作為Th細胞分

4、化過程中作用相反的兩個特異性轉(zhuǎn)錄因子，是決定Th1/Th2分化的關(guān)鍵因素，替代了以往的細胞因子模式。本試驗擬通過研究33例慢性蕁麻疹患者和20例健康對照者外周血PBMCs中T-bet和GATA-3表達水平及T-bet/GATA-3的比率變化對Th1/Th2分化失衡的調(diào)節(jié)作用，進一步從轉(zhuǎn)錄水平闡述慢性蕁麻疹發(fā)病機制。探討是否可以以，T-bet/GATA-3為靶點，從細胞分化的源頭上進行干預(yù)，以促使Th1/Th2處于動態(tài)平衡，為臨床治療慢性

5、蕁麻疹提供一個特異性更強，副作用更小的策略。 方法：患者組33例患者均來自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科門診?；颊呓M(慢性蕁麻疹患者組)入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均為典型的慢性蕁麻疹患者。(2)病程超過8周，每周發(fā)作不少于2次。(3)近2個月內(nèi)未用皮質(zhì)類固醇激素或免疫抑制劑等影響全身免疫功能的藥物。1個月內(nèi)未服用息斯敏(阿司咪唑)，1周內(nèi)未使用抗組胺藥者。(4)年齡18-60歲者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)食物、藥物、感染等致敏，臨床上有明確

6、原因者。(2)人工性蕁麻疹、寒冷性蕁麻疹、膽堿能性蕁麻疹、日光性蕁麻疹、壓迫性蕁麻疹及血管性水腫者。(3)孕婦或哺乳婦。(4)同時患有紅斑狼瘡、天皰瘡、皮肌炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病以及腫瘤和其他嚴(yán)重系統(tǒng)疾病及其他過敏性疾病、皮膚病的患者。對照組：來自本院健康醫(yī)護人員，共20例。均無過敏性疾患和自身免疫性疾病及家族史。經(jīng)t檢驗，性別、年齡與病例組無顯著差異。 各抽取外周靜脈血6ml，各加乙二胺四乙酸(ethylenedia

7、mine-tetraacetic acid，EDTA)0.8 ml抗凝，按照密度梯度離心法分離PBMCs、提取RNA，再應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄多聚合酶鏈反應(yīng)(RR-PCR)方法檢測外周血單個核細胞T-bet和GATA-3 mRNA表達強度。具體操作嚴(yán)格按照各試劑說明書進行。統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS14.0統(tǒng)計軟件處理。采用卡方檢驗T-bet和GATA-3在慢性蕁麻疹患者組與在健康正常對照組中的表達頻率有無顯著性差異。由于T-bet和GATA-3mR

8、NA在慢性蕁麻疹患者組與在健康對照組中的表達強度的資料不滿足正態(tài)分布和方差齊性條件，因此采用兩個獨立樣本比較的Wilcoxon秩和檢驗來分析其有無統(tǒng)計學(xué)差異。P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1．慢性蕁麻疹患者組及對照組PBMCs中T-bet mRNA表達強度的中位數(shù)分別為18.70％，28.55％，患者組較對照組低表達。兩組表達強度采用秩和檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)； 2．慢性蕁麻疹患者組及

9、對照組PBMCs中GATA-3mRNA表達強度的中位數(shù)分別為58.48％，22.47％，患者組明顯呈高表達，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.006)； 3．慢性蕁麻疹患者組及對照組患者組T-bet/GATA-3的比率較對照組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.025)； 結(jié)論：1．慢性蕁麻疹患者T-bet mRNA的表達強度較對照組減弱，而GATA-3 mRNA的表達強度較對照組顯著增強；反映了慢性蕁麻疹患者存在Th1細胞亞群