玫瑰糖疹患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子T-bet mRNA及GATA-3 mRNA的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的:玫瑰糠疹(pityriasis rosea,PR)于1860年由法國(guó)Gilbert首先命名,是一種病因尚不完全清楚的自限性的炎癥性皮膚病,病程約4～6周。玫瑰糠疹的發(fā)病率較高,約為172.2/10萬(wàn)人年,為全部皮膚病的1.31％,以青年和成年人居多,大樣本調(diào)查顯示發(fā)病高峰在20～29歲之間,平均發(fā)病年齡為22.7歲,無(wú)明顯性別差異。復(fù)發(fā)率低,其復(fù)發(fā)率僅3％。玫瑰糠疹病因及發(fā)病機(jī)制不明,多數(shù)學(xué)者傾向于病毒感染,近期的研究發(fā)現(xiàn),玫瑰糠

2、疹患者皮膚內(nèi)浸潤(rùn)的細(xì)胞主要為輔助/誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞,表皮、真皮乳頭內(nèi)朗漢斯細(xì)胞明顯增多,表明細(xì)胞免疫反應(yīng)參與了本病的發(fā)生。免疫系統(tǒng)中,CD4+輔助性T細(xì)胞可分化為不同的細(xì)胞譜系,如Th1、Th2、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th17。轉(zhuǎn)錄因子T-bet(T box expressed in T cells)和GATA-3(GATA-binding protein-3)是決定Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞或Th2細(xì)胞分化的兩個(gè)關(guān)鍵且特異性轉(zhuǎn)錄因子。T-bet是T

3、h1細(xì)胞分化的特異性轉(zhuǎn)錄因子。T-bet調(diào)節(jié)Th1細(xì)胞表達(dá)的重要性已通過(guò)敲除小鼠1-bet基因得到證實(shí)。T-bet基因敲除小鼠的CD4+T細(xì)胞在Th1極化反應(yīng)中存在嚴(yán)重缺陷,即使用IL-12定向誘導(dǎo)培養(yǎng)仍不能產(chǎn)生Th1特征性細(xì)胞因子。GATA-3是一種鋅指蛋白,屬GATA蛋白家族成員之一,首先被發(fā)現(xiàn)于T淋巴細(xì)胞及胚胎期腦中,僅在Th2中表達(dá),是選擇性表達(dá)于Th2細(xì)胞的Th2特異性轉(zhuǎn)錄因子,可調(diào)控初始CD4+T細(xì)胞向Th2類細(xì)胞分化,在促

4、進(jìn)Th2類細(xì)胞因子分泌同時(shí)還能使發(fā)育中的Th1細(xì)胞反轉(zhuǎn)為Th2型。敲除小鼠GATA-3基因,可導(dǎo)致Th2細(xì)胞失表達(dá)。由于T-bet和GATA-3在Th細(xì)胞分化中的重要作用,我們擬通過(guò)檢測(cè)玫瑰糠疹患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中轉(zhuǎn)錄因子T-bet mRNA和GATA3 mRNA的表達(dá)水平,與正常人群做比較分析,從調(diào)控轉(zhuǎn)錄水平探討Th1和Th2型細(xì)胞在玫瑰糠疹發(fā)病機(jī)制

5、中的作用。
　　 實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種基于傳統(tǒng)PCR檢測(cè)方法上的新技術(shù),在實(shí)時(shí)熒光定量PCR的過(guò)程中,靶序列的擴(kuò)增與熒光信號(hào)的檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行,定量PCR儀全程采集熒光信號(hào),實(shí)驗(yàn)結(jié)束后分析軟件自動(dòng)按數(shù)學(xué)算法扣除熒光本底信號(hào)并設(shè)定閾值從而得到每個(gè)樣品的Ct值。它有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,具有高特異性、可靠性、實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。
　　 研究對(duì)象和方法:患者組選擇2009年11月至2010年8月在河北

6、醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科門診就診并經(jīng)臨床確診并符合以下條件的17例患者:(1)均有典型的臨床表現(xiàn)(胸背部與皮紋長(zhǎng)軸一致的黃紅色圓形或橢圓形境界清楚的斑疹),病程為3天～2月;(2)受試前臨床檢查未發(fā)現(xiàn)急性感染征象,無(wú)其他免疫相關(guān)性疾病,1個(gè)月內(nèi)無(wú)系統(tǒng)用藥史,1月內(nèi)未服用免疫抑制劑及激素,1周內(nèi)未服用抗組胺藥。無(wú)不潔性行為史。病例組:男性:9例。女性:8例。平均年齡:(25.5±8.8)歲。對(duì)照組:本院同期健康醫(yī)護(hù)人員20例,經(jīng)t檢驗(yàn)性別、

7、年齡與實(shí)驗(yàn)組病例無(wú)顯著差異。采用SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(real-timefluorescence quantitative RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)17例玫瑰糠疹患者和20例正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞中T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:玫瑰糠疹患者與對(duì)照組外周血中T-bet mRNAAvg△Ct值分別為3.33±0.94與4.31±1.11,經(jīng)t檢驗(yàn),t=2.85,P=

8、0.007(P＜0.05),提示玫瑰糠疹患者外周血T-bet mRNA高于對(duì)照組?；颊吲c對(duì)照組外周血中GATA-3 mRNA Avg△Ct分別為5.22±0.69與4.36±1.02,經(jīng)t檢驗(yàn),t=-2.92,P=0.006(P＜0.05),提示玫瑰糠疹患者外周血GATA-3 mRNA的表達(dá)低于對(duì)照組。
　　 結(jié)論:玫瑰糠疹患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中T-bet mRNA表達(dá)高于正常對(duì)照組,GATA-3mRNA表達(dá)低于正常對(duì)照組,T-