先心病室間隔缺損合并不同程度肺高壓患兒外周血單核細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3mRNA的表達(dá).pdf

1、目的：先心病室間隔缺損(ventricular septal defect，VSD)簡稱室缺，是最常見的先心病之一，約占23～30%?；純撼錾笥捎诜窝h(huán)打開，使肺動(dòng)脈壓力驟減，右室壓力也隨之減小，使左右室壓差顯著。當(dāng)室間隔出現(xiàn)缺損時(shí)，則左室血液將有一部分經(jīng)缺損流入右心室，長期左向右分流，使肺小動(dòng)脈中層增生，內(nèi)膜增厚，肺血管阻力進(jìn)一步增加，形成肺動(dòng)脈高壓，如果沒有及時(shí)治療，肺小動(dòng)脈病變進(jìn)行性加劇，形成不可逆性肺血管阻塞性病變，肺血管阻力

2、甚至超過體循環(huán)的阻力，導(dǎo)致右向左分流，患兒出現(xiàn)紫紺，即艾森曼格綜合癥。
　　肺動(dòng)脈高壓(pulmonary arterial hypertension，PAH)是先心病室間隔缺損(VSD)最常見的并發(fā)癥。另外，VSD患兒在圍手術(shù)期可出現(xiàn)PAH危象，是圍手術(shù)期死亡的重要原因之一。國內(nèi)對于低月齡、低體重的VSD合并PAH患兒的外科治療，與國際先進(jìn)水平尚有相當(dāng)大的差距，是當(dāng)今我國小兒心外科的主要挑戰(zhàn)之一。
　　有研究報(bào)道先心病患兒

3、存在免疫功能低下和免疫功能紊亂，即存在Th1→Th2漂移，并且肺充血型先心病較肺缺血型先心病患兒免疫功能紊亂更為明顯。Th1、Th2及其相互之間的平衡在免疫應(yīng)答中起著關(guān)鍵作用。在T細(xì)胞亞群分化過程中，轉(zhuǎn)錄因子具有重要的調(diào)節(jié)作用。轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3分別特異性地表達(dá)于Th1和Th2，是決定Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞或Th2細(xì)胞分化的兩個(gè)關(guān)鍵且特異性轉(zhuǎn)錄因子。
　　實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種基于傳統(tǒng)PCR檢測方法上的新技術(shù)，它有

4、效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，具有高特異性和可靠性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)擬通過檢測小年齡、低體重室間隔缺損合并不同程度肺高壓患兒圍手術(shù)期外周血單核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中轉(zhuǎn)錄因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表達(dá)水平，從調(diào)控轉(zhuǎn)錄水平探討Th1和Th2細(xì)胞在先天性室間隔缺損合并不同程度肺高壓圍術(shù)期免疫功能方法：201

5、1年3月至2011年12月在本院心臟外科住院接受先心病手術(shù)治療并符合以下條件的VSD合并不同程度PAH患者，入選標(biāo)準(zhǔn)：①所有病例均經(jīng)體檢、輔助檢查及彩色心臟超聲檢查確診為先天性心臟病室間隔缺損患者，年齡1歲以內(nèi)，體重＜10Kg；②嚴(yán)格按照納入標(biāo)準(zhǔn)選VSD合并輕度PAH(肺動(dòng)脈壓/主動(dòng)脈壓在0.3～0.45)、中度PAH(0.45～0.75)、重度PAH(＞0.75)以及未合并PAH者各10例，所有入選患兒均在體外循環(huán)開始前直接測壓，確定

6、肺高壓程度；③所有患兒其他臟器無嚴(yán)重疾病史，無其它缺氧相關(guān)疾病史，無嚴(yán)重感染和自身免疫性疾病史；④排除原發(fā)性肺動(dòng)脈高壓；⑤本實(shí)驗(yàn)經(jīng)河北省兒童醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患兒家屬簽署知情同意書。
　　研究對象抽取外周靜脈血，采用SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測PBMCs中轉(zhuǎn)錄因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的表達(dá)水平。所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，多組間比較用單因素方差分析。P＜0.05有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.先心病室間隔缺損合并不同程度PAH患兒(共4組)之間的統(tǒng)計(jì)比較結(jié)果如下：
　　1.1 T-bet基因的統(tǒng)計(jì)結(jié)果：無PAH組、輕度PAH組、中度PAH組、重度PAH組△Ct值分別為5.74±2.15、6.93±1.45、7.51±1.96、7.43±1.31。先天性室間隔缺損合并中度PAH組T-bet基因的表達(dá)較末合并PAH組低(P=0.024＜0.05)；先天性室間隔缺損合并重度PAH組

8、T-bet基因的表達(dá)較未合并PAH組低(P=0.033＜0.05)；其余各組之間無差別(P＞0.05)。
　　1.2 GATA-3基因的統(tǒng)計(jì)結(jié)果：無PAH組、輕度PAH組、中度PAH組、重度PAH組△Ct值分別為3.79±2.10、5.43±1.29、5.36±1.36、5.35±1.20。先天性室間隔缺損合并輕度PAH組GATA-3基因的表達(dá)較未合并PAH組低(P=0.025＜0.05)；先天性室間隔缺損合并中度PAH組GATA

9、-3基因的表達(dá)較未合并PAH組低(P=0.018＜0.05)；先天性室間隔缺損合并重度PAH組GATA-3基因的表達(dá)較未合并PAH組低(P=0.020＜0.05)；其余各組之間無差別(P＞0.05)。
　　2.先心病室間隔缺損在圍手術(shù)期(術(shù)前、術(shù)后1d、術(shù)后3d、術(shù)后7d)，各組之間的統(tǒng)計(jì)比較結(jié)果如下：
　　2.1 T-bet基因的統(tǒng)計(jì)結(jié)果：先心病室間隔缺損在圍手術(shù)期術(shù)前、術(shù)后1d、術(shù)后3d、術(shù)后7d△Ct值分別為5.97±

10、1.49、6.74±2.29、7.30±1.22、7.17±1.27。術(shù)前患者T-bet基因的表達(dá)較術(shù)后3d患者低(P=0.045＜0.05)；術(shù)前患者T-bet基因的表達(dá)較術(shù)后7d患者低(P=0.002＜0.05)；術(shù)后1d患者T-bet基因的表達(dá)較術(shù)后7d患者低(P=0.038＜0.05)；其余各組之間無差別(P＞0.05)。
　　2.2 GATA-3基因的統(tǒng)計(jì)結(jié)果：各組之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P值均＞0.05)。
　　結(jié)論

11、：本研究從轉(zhuǎn)錄水平上提示先天性室間隔缺損合并不同程度PAH患兒的在圍手術(shù)期存在免疫功能紊亂。先天性室間隔缺損合并中、重度PAH組T-bet基因的表達(dá)較未合并PAH組低，即先天性室間隔缺損合并中、重度PAH組患兒Th1細(xì)胞數(shù)量減少的可能性大，可能存在細(xì)胞免疫下降；先天性室間隔缺損合并輕、中、重度PAH組GATA-3基因的表達(dá)較未合并PAH組低，即先天性室間隔缺損合并輕、中、重度PAH組患兒存在Th2細(xì)胞數(shù)量減少的可能性大，可能存在體液免疫