血竭聚乳酸緩釋微球的制備及體外釋藥研究.pdf

1、目的：血竭(Dragon’sb1ood)，又名麒麟竭，為中醫(yī)常用的活血散瘀和止血藥，性平、味甘、咸。在復(fù)方中的應(yīng)用主要是將血竭與其它味中藥一起煎熬。由于血竭不溶于水，遇熱變成膠狀，故煎熬時(shí)成膠后與其余藥渣混在一起，被過濾出，失去其藥理作用，這樣就浪費(fèi)了寶貴的血竭資源。本研究采用乳化溶劑揮發(fā)法制得血竭聚乳酸緩釋微球，以期達(dá)到緩釋作用，減少服藥次數(shù)，為新劑型的研究和資源的合理利用提供參考。 方法：首先依據(jù)2000版藥典方法對(duì)血竭應(yīng)用

2、薄層色譜法和紫外分光光度法進(jìn)行鑒定，并對(duì)其松香和醇不溶物進(jìn)行檢查，應(yīng)用反相高效液相色譜法測(cè)定血竭中血竭素含量。選擇聚乳酸為載體，二氯甲烷為有機(jī)溶劑，明膠水溶液為分散介質(zhì)，用乳化溶劑揮發(fā)法制備微球。選取影響微球性質(zhì)較顯著的4個(gè)因素作為考察對(duì)象，即投藥比(血竭：聚乳酸)、分散介質(zhì)(明膠)的濃度、有機(jī)相中聚乳酸的濃度(聚乳酸質(zhì)量：有機(jī)相體積)、攪拌速度，每個(gè)因素三個(gè)水平，按L9(34)正交設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)安排，以跨距(均勻度)、載藥量、包封率為指

3、標(biāo)，綜合考察影響因素，確定緩釋微球制備的最佳工藝。 血竭聚乳酸緩釋微球含量測(cè)定采用反相高效液相色譜法：選擇合適檢測(cè)波長(zhǎng)，合適的固定相和流動(dòng)相的組成、比例、流速，使血竭素色譜峰符合檢測(cè)要求，調(diào)整色譜流動(dòng)相使分離度、理論塔板數(shù)、對(duì)稱因子符合要求。并進(jìn)行精密度、重現(xiàn)性、線性、穩(wěn)定性、回收率試驗(yàn)等方法學(xué)考察。 血竭聚乳酸緩釋微球體外釋藥實(shí)驗(yàn)：將血竭聚乳酸緩釋微球裝入透析袋內(nèi)，置于37℃恒溫磁力攪拌中，含0.8％吐溫-80的40％

4、乙醇作為釋放介質(zhì)，用紫外分光光度計(jì)在475nm處測(cè)定釋放液的吸收度，計(jì)算微球累積釋藥百分率，對(duì)時(shí)間作圖，以血竭粉末作對(duì)照。同時(shí)分別考察不同分子量聚乳酸緩釋微球的體外釋放情況。 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：將制備的血竭聚乳酸緩釋微球進(jìn)行高濕度、高溫、強(qiáng)光照射的影響因素實(shí)驗(yàn)及長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)，分別于制備后一個(gè)月、兩個(gè)月、三個(gè)月、六個(gè)月測(cè)定其含量和釋放度，考察其穩(wěn)定性。 結(jié)果：通過單因素考察和正交實(shí)驗(yàn)，篩選出了優(yōu)化制備工藝和處方，根據(jù)優(yōu)化處方制備的微

5、球圓整光滑，呈鮮紅色，不粘連，粒徑均勻。從正交實(shí)驗(yàn)極差分析結(jié)果得知，影響微球形成的主要因素是血竭和聚乳酸的投藥比，其次為明膠濃度、聚乳酸濃度和攪拌速度。根據(jù)優(yōu)化處方，重復(fù)實(shí)驗(yàn)5次，通過對(duì)各指標(biāo)的測(cè)定，說明微球制備工藝的重現(xiàn)性良好。 微球含量測(cè)定：選擇用Diamonsil(鉆石)C18(4.6mm×250mm)色譜柱，乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氫鈉(48：52)為流動(dòng)相；磷酸調(diào)節(jié)pH為3.14；柱溫40℃；流速1.0mL.

6、min-1；在440nm波長(zhǎng)處測(cè)定含量，理論塔板數(shù)按血竭素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。同歸方程Y=3E+0.6X+37851，r=0.9999(n=6)，血竭素在濃度為13.07～45.75μg.mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。日內(nèi)精密度RSD=0.93％，穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD=1.13％，平均回收率為102.4％；RSD=2.71％。血竭聚乳酸緩釋微球的平均載藥量和包封率為21.97％和55.76％。 體外釋藥實(shí)驗(yàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A=0.

7、1104+0.0284c，r=0.9998(n=6)，血竭素濃度在1.452～14.52μg.mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.66％，RSD=2.98％，對(duì)照藥材6小時(shí)溶出93.10％，血竭PLA20000緩釋微球16小時(shí)溶出76.52％。血竭PLA50000緩釋微球28小時(shí)溶出74.69％，血竭PLA100000微球48小時(shí)溶出77.35％。優(yōu)化處方血竭緩釋微球體外釋放數(shù)據(jù)符合Higuchi方程：Q=0.1855t1/2

8、+0.0939r=0.9745。 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：血竭微球在40℃下放置5天和10天、RH75％下放置5天和強(qiáng)光照射下放置5天，外觀、載藥量和釋放度基本無變化。在60℃時(shí)放置，血竭微球軟化粘連。在RH75％下放置10天，血竭微球吸濕產(chǎn)生變化。在強(qiáng)光照射下放置10天微球粘連、結(jié)塊。血竭微球在長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)中含量和釋放度基本穩(wěn)定。 結(jié)論：根據(jù)2000版藥典進(jìn)行鑒別、檢查、含量測(cè)定，血竭均符合要求。采用乳化溶劑揮發(fā)法制備血竭聚乳酸