大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三維定向誘導(dǎo)和體內(nèi)構(gòu)建組織工程軟骨的初步實驗研究.pdf

1、目的：探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇辦法，比較MSCs在平面條件和在三維支架下向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)的差異，細(xì)胞增殖力、細(xì)胞周期的變化，以及在裸鼠體內(nèi)構(gòu)建組織工程軟骨的可能性。方法：采用梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法分離MSCs，對所分離細(xì)胞進(jìn)行SH3免疫組化鑒定，用含70％DMEM培養(yǎng)基、20％FBS、10％DMSO組成的凍存液在4℃、-70℃、-196℃的分階段降溫凍存MSCs，及快速復(fù)蘇。用TGF-β1為主的誘導(dǎo)因子

2、在平面條件下或在膠原、明膠支架上將MSCs向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)，觀察細(xì)胞在材料上的貼附率，對誘導(dǎo)細(xì)胞行Ⅱ型膠原免疫組化、原位雜交檢測，MTT法和流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞增殖力、細(xì)胞周期變化。將誘導(dǎo)后細(xì)胞與膠原海綿、藻酸鹽凝膠復(fù)合，植入裸鼠體內(nèi)，4w、8w檢測體內(nèi)組織工程軟骨的形成情況。結(jié)果：使用以上兩種分離方法分離出MSCs，經(jīng)SH3免疫組化鑒定，復(fù)合MSCs的特征，P1、P5代凍存和復(fù)蘇細(xì)胞數(shù)成活率在85％以上，使用的以TGF-β1為主的誘導(dǎo)因子

3、，在平面條件下或在膠原、明膠支架上將MSCs向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)，Ⅱ型膠原免疫組化、原位雜交檢測均為陽性。MSCs在膠原支架上分泌Ⅱ型膠原數(shù)量、細(xì)胞增殖力、細(xì)胞數(shù)均比平面誘導(dǎo)條件下高，MSCs在膠原支架上生長，細(xì)胞周期與平面誘導(dǎo)條件下相比未發(fā)生明顯改變，細(xì)胞無畸變、瘤變傾向，細(xì)胞凋亡數(shù)比平面誘導(dǎo)時減少。誘導(dǎo)后的MSCs細(xì)胞與膠原海綿、藻酸鹽凝膠復(fù)合，在裸鼠體內(nèi)可形成類軟骨樣組織。 結(jié)論：采用梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法可有效分離出MSCs，本實