轉(zhuǎn)基因骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與去細(xì)胞支架構(gòu)建組織工程韌帶的實驗研究.pdf

1、目的：探索行之有效的組織工程韌帶(tissue-engineered ligament，TEL)構(gòu)建方法。 方法： (1)構(gòu)建攜帶人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)基因和增強型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein，eGFP)報告基因的重組腺病毒載體Ad.bFGF-eGFP，并進(jìn)行鑒定、擴(kuò)增。 (2)分離、

2、培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)，利用Ad.bFGF-eGFP轉(zhuǎn)染兔BMSCs，觀察BMSCs表達(dá)、分泌bFGF的情況，及bFGF對BMSCs增殖、分化及產(chǎn)生韌帶特異性細(xì)胞外基質(zhì)的影響。 (3)采用0.01％胰蛋白酶+1％DCA+核酸酶法及TBP法對兔髕韌帶行去細(xì)胞處理，并進(jìn)行組織學(xué)及生物力學(xué)檢測，探索最佳的韌帶去細(xì)胞方法，構(gòu)建去細(xì)胞徹底、膠原結(jié)構(gòu)保持完整

3、、力學(xué)性能良好的去細(xì)胞韌帶支架。 (4)將轉(zhuǎn)染Ad.bFGF-eGFP的BMSCs種植于去細(xì)胞韌帶支架上，體外構(gòu)建組織工程韌帶，觀察種子細(xì)胞在支架上的生長、增殖情況。 結(jié)果： (1)成功構(gòu)建Ad.bFGF-eGFP，其中含有eGFP報告基因； (2)Ad.bFGF-eGFP轉(zhuǎn)染BMSCs后，bFGF蛋白大量表達(dá)、分泌，且顯著促進(jìn)BMSCs增殖并向成纖維細(xì)胞表型分化及加強韌帶特異性細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生；

4、 (3)利用0.01％胰蛋白酶+1％DCA+核酸酶方法可完全去除韌帶細(xì)胞成分，所得去細(xì)胞韌帶支架力學(xué)性能良好、膠原結(jié)構(gòu)保持完整，優(yōu)于TBP法；(4)轉(zhuǎn)基因BMSCs在去細(xì)胞韌帶支架上生長良好，增殖顯著高于對照組。 結(jié)論： (1)經(jīng)轉(zhuǎn)染Ad.bFGF-eGFP改造的BMSCs增殖、向成纖維細(xì)胞表型分化及產(chǎn)生韌帶特異性細(xì)胞外基質(zhì)的能力顯著增強，符合構(gòu)建TEL種子細(xì)胞的要求； (2)0.01％胰蛋白酶+1％DCA+核酸