基因修飾人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為骨組織工程異基因種子細(xì)胞的實(shí)驗研究.pdf

1、目的:該課題擬應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒將hCTLA4Ig基因?qū)肴斯撬栝g充質(zhì)干細(xì)胞,并篩選獲得MSCs-C細(xì)胞克隆或細(xì)胞群;研究基因修飾MSCs成骨分化潛能和減輕免疫排斥反應(yīng)情況,觀察其作為異基因種子細(xì)胞體內(nèi)成骨能力.從理論上講,這種細(xì)胞既可能保持成骨分化潛能;又可能通過表達(dá)CTLA4Ig控制免疫排斥反應(yīng).這種特性更有利于MSCs-C的定植,可能對免疫排斥反應(yīng)不強(qiáng)的異基因MSCs移植是足夠的.從而使異基因MSCs-C作為骨組織工程的種子細(xì)胞成為可

2、能,為解決骨組織工程種子細(xì)胞來源提供一種新的方法,拓寬骨組織工程的應(yīng)用范圍.另外,我們還擬構(gòu)建hTERT-真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染MSCs以延長其生命期,為將來獲得雙基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞克隆:MSCs-T-C細(xì)胞克隆奠定基礎(chǔ),爭取建立一種骨組織工程標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系.結(jié)論:1.成功制備了攜帶hCTLA4Ig基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒.2.成功獲得了MSCs-C細(xì)胞群.這些細(xì)胞在G418壓力下生長3w有目的基因轉(zhuǎn)錄和目的蛋白表達(dá)及分泌.3.MSCs的誘導(dǎo)成骨

3、后代免疫原性增強(qiáng),一定數(shù)量在體外能夠顯著刺激PBMCs增殖;而MSCs-C及其成骨分化后代免疫原性均較低,不能顯著刺激PBMCs增殖.4、MSCs-C體外能顯著抑制MLR中T淋巴細(xì)胞的增殖,這種作用呈劑量依賴關(guān)系并顯著強(qiáng)于相同數(shù)量MSCs的作用.5.MSCs-C在體外能夠被誘導(dǎo)成骨.6.MSCs-C生長速度比MSCs慢,在該實(shí)驗條件下不能進(jìn)行單克隆篩選.7.以MSCs-C為種子細(xì)胞構(gòu)建的組織工程骨異種移植到F344大鼠皮下,術(shù)后2-12