葡聚糖磁性微球的制備及固定化木瓜蛋白酶的研究.pdf

1、天然高分子磁性微球是近20多年發(fā)展起來的一種新型多功能材料，并已在生物化工、細(xì)胞學(xué)、生物醫(yī)學(xué)工程等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。其中，葡聚糖磁性微球由于其優(yōu)良的生物相容性和生物可溶性，骨架材料性質(zhì)穩(wěn)定，強(qiáng)度較高和無毒副作用等優(yōu)點(diǎn)而受到越來越多的關(guān)注。高分子葡聚糖上的活性基團(tuán)經(jīng)過表面修飾可以負(fù)載多種功能分子(酶、抗體、肽、DNA及RNA)，從而可制備多功能磁性復(fù)合物，作為新型的功能材料在酶的固定化、靶向藥物、細(xì)胞分離和免疫測定等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。

2、 (1)采用反相懸浮包埋技術(shù)，以納米鐵粉作磁核、環(huán)氧氯丙烷為交聯(lián)劑制備了葡聚糖磁性微球。用透射電鏡、原子力顯微鏡、激光粒度分布儀和紅外光譜儀等對其進(jìn)行形貌觀察和結(jié)構(gòu)表征，并測定了表面活性基團(tuán)的數(shù)量和對蛋白的吸附量。結(jié)果表明，制備的微球比表面積大，粒徑分布均勻，穩(wěn)定性和磁響應(yīng)性好，大小兩種粒徑的磁性微球(615nm和193nm)的表面活性基團(tuán)數(shù)分別為9.23 μmol/g(5.56×10<'15>個-OH/mg)和11.32 μm

3、ol/g(6.81×10<'15>個-OH/mg)，吸附蛋白量為36.02mg/g(3.19×10<'14>個/mg)和53.62m/g(4.75×10<'14>個/mg)，活性基團(tuán)數(shù)從理論上完全能滿足檢測要求，可用于細(xì)胞分離和免疫分析。 (2)以木瓜蛋白酶為模擬生物蛋白分子，利用共價(jià)結(jié)合法固定化木瓜蛋白酶，通過對比溶液酶和固定化酶的酶學(xué)性質(zhì)，考察了固定化過程對酶蛋白結(jié)構(gòu)和活性上的影響，為實(shí)際應(yīng)用提供參數(shù)。結(jié)果表明大小兩種粒徑的

4、磁性微球(615nm和193nm)固定化酶后，酶蛋白載量分別為21.3mg/g和23.5mg/g，表觀米氏常數(shù)K<,m><'aPP>分別為0.16mg/mL和0.12mg/mL，磁性固定化酶的最適溫度、熱穩(wěn)定性和貯存穩(wěn)定性等都明顯優(yōu)于溶液酶，溶液酶經(jīng)固定化后可連續(xù)重復(fù)使用提高利用效率，穩(wěn)定性得到提高。實(shí)驗(yàn)證明，木瓜蛋白酶固定在葡聚糖磁性微球上后，其活性中心沒有受到明顯影響，仍具有催化活性，對變性劑的抵抗能力大為提高，我們認(rèn)為固定化能保持