羅非魚副產(chǎn)物酶解工藝優(yōu)化及殼聚糖埃洛石微球固定化木瓜蛋白酶的研究.pdf

1、羅非魚是比較常見的魚品種，在水產(chǎn)加工方面主要用于魚片的生產(chǎn)，副產(chǎn)物一般作飼料及肥料，利用率很低，而羅非魚副產(chǎn)物中富含大量營養(yǎng)物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、活性多肽、脂肪、微量元素等，利用生物酶解技術(shù)，從羅非魚副產(chǎn)物提取抗氧化活性多肽有很強的應(yīng)用價值。但是生物酶成本高，重復使用率低，尋找合適的方法使酶的重復使用率變高是亟待解決的問題。
　?。ㄒ唬┝_非魚副產(chǎn)物的最佳酶解條件
　　以羅非魚副產(chǎn)物為原料，通過控制酶解條件制備活性多肽，利用響應(yīng)面

2、優(yōu)化酶解條件。以水解度和多肽得率為指標，選取彈性蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶對羅非魚副產(chǎn)物分別進行酶解，優(yōu)選出酶解的最佳條件。在酶濃度20.56U/g，料液比1∶5,自然pH(7.6)，溫度38.28℃下水解3.19h，彈性蛋白酶對羅非魚副產(chǎn)物的水解度達19.89％，多肽得率為0.98 mg/mL;在酶濃度50.63 U/g，pH5.14,料液比1∶5,溫度38.28℃條件下水解2h，木瓜蛋白酶對羅非魚副產(chǎn)物的水解度達9.99

3、％，多肽得率為0.65 mg/mL;在酶濃度31.37 U/g，pH7.06,室溫(22℃)，料液比1∶5條件下水解2.87 h，蛋白酶K對羅非魚副產(chǎn)物的水解度達16.83％，多肽得率為0.55 mg/mL;在酶濃度52.37 U/g，pH6.92,料液比1∶5,室溫(22℃)條件下水解2.26 h，胰蛋白酶對羅非魚副產(chǎn)物的水解度為12.62％，多肽得率為0.42mg/mL。故羅非魚副產(chǎn)物的最佳水解酶為彈性蛋白酶。
　　（二）羅非

4、魚副產(chǎn)物酶解物的抗氧化分析
　　選取彈性蛋白酶及木瓜蛋白酶的最優(yōu)條件制備羅非魚副產(chǎn)物酶解物，分別采用真空干燥法、冷凍干燥法、常溫干燥法、噴霧干燥法等不同干燥方法進行干燥，制備多肽粉。通過鄰苯三酚自氧化法、DPPH法、普魯蘭士法、磷鉬絡(luò)合物法等方法，比較不同干燥方法對多肽粉抗氧化活性的影響。結(jié)果表明由彈性蛋白酶酶、木瓜蛋白酶解羅非魚副產(chǎn)物制成的多肽粉有較強的抗氧化活性。兩種多肽粉都具有較強的還原能力，由木瓜蛋白酶制備的多肽粉對清除羥

5、自由基、DPPH·、超氧陰離子自由基的清除能力優(yōu)于由彈性蛋白酶制備的多肽粉，由彈性蛋白酶制成的多肽粉的總抗氧化活性和脂質(zhì)抗氧化活性優(yōu)于由木瓜蛋白酶制備的多肽粉，且不同的干燥方法對多肽粉的抗氧化活性有較大影響，可根據(jù)抗氧化活性的要求，選擇合適的酶及干燥方法制備多肽。整體而言，木瓜蛋白酶所制備的多肽粉具有更強的抗氧化活性。
　　通過氨基酸自動分析儀及質(zhì)譜分析，彈性蛋白酶酶解制成的多肽粉分子質(zhì)量分布范圍在400～1500 kD以內(nèi)，木瓜

6、蛋白酶酶解制成的多肽粉分子質(zhì)量分布范圍在500～1700 kD，由這兩種酶對羅非魚副產(chǎn)物的酶解效果較好，酶解產(chǎn)物以多肽為主。氨基酸組成分析表明，多肽粉氨基酸含量豐富，可作為氨基酸營養(yǎng)補充劑應(yīng)用到食品中去。
　　（三）殼聚糖埃洛石復合微球固定化木瓜蛋白酶
　　運用交聯(lián)-吸附法成功制備出了殼聚糖埃洛石(CS/HNTs)復合微球，用于固定木瓜蛋白酶，通過紅外、電鏡、熒光標記等方法，證實了木瓜蛋白酶已通過交聯(lián)吸附的方法被固定在CS/

7、HNT復合微球上。CS與HNTs比例為2∶1時，制球效果最好，固定率最高，達1.76mg/g;木瓜蛋白酶的濃度為1 mg/mL時，固定化木瓜蛋白酶的相對活性最高。固定化木瓜蛋白酶的相對活性先隨著固定化時間的增加而增加，但在10 h后維持平衡趨勢;木瓜蛋白酶在pH為6.8的時候有最大的相對活性，游離酶在pH為7.2時有最大的相對活性，這與固定化木瓜蛋白酶的載體結(jié)構(gòu)有關(guān);固定化酶的最適反應(yīng)溫度為60℃，游離酶的最適反應(yīng)溫度為50℃。在儲存3