酶解蝦副產(chǎn)物制備ACE抑制肽.pdf

1、蝦仁加工過程中,產(chǎn)生了大量的蝦副產(chǎn)物。為了提高蝦副產(chǎn)物的資源利用率,本文擬利用酶法水解蝦副產(chǎn)物制備ACE抑制肽。具體研究內(nèi)容如下:
　　首先搜集了60個公開報道的食源性ACE抑制肽,分析了氨基酸的疏水性對ACE抑制活性的影響,以及20種氨基酸在C端、N端的出現(xiàn)頻率,發(fā)現(xiàn)ACE抑制肽C末端氨基酸的疏水性與其ACE抑制活性之間呈正相關(guān)關(guān)系;芳香族氨基酸或脯氨酸在ACE抑制肽C末端出現(xiàn)頻率較高。然后,分析了常用水解酶的酶切位點(diǎn),最后選擇

2、α-胰凝乳蛋白酶和脯氨酸蛋白酶復(fù)合酶解蝦副產(chǎn)物制備ACE抑制肽。
　　其次,分析了蝦副產(chǎn)物的蛋白質(zhì)含量和氨基酸組成,蝦副產(chǎn)物中蛋白質(zhì)含量為59.94％,與ACE抑制活性相關(guān)的芳香族氨基酸和脯氨酸含量為14.24%。在一定溫度、pH值和加酶量條件下,以蛋白質(zhì)的水解度和ACE抑制率為指標(biāo),確定α-胰凝乳蛋白酶、脯氨酸蛋白酶的最佳酶解時間均為4h,酶解產(chǎn)物ACE抑制的IC50值為1.645mg protein/mL。
　　然后,對

3、蝦副產(chǎn)物酶解液進(jìn)行分離、純化。第一步用500Da和1000Da的透析袋進(jìn)行透析,得到0~500Da(F1)與500~1000Da(F2)兩個組分,透析后組分F1和組分F2的IC50值分別降為0.333mg peptide/mL和1.320mg peptide/mL;第二步采用凝膠層析對組分F1和組分F2繼續(xù)分離:組分F1和組分F2都被分成了5個峰,組分F1中峰F1-G5的ACE抑制率最高,為49.24%;組分F2中峰F2-G2的ACE抑

4、制率最高,為39.07%。分別選擇峰F1-G5和峰F2-G2這兩個峰進(jìn)行后續(xù)分離。第三步采用RP-HPLC分離,RP-HPLC分離結(jié)果顯示,峰F1-G5可以分為6個峰,其中峰F1-G5-H1和峰F1-G5-H4的ACE抑制率最高,分別為94.21%、95.88%;峰F2-G2可以分為4個峰,只有峰F2-G2-H1和峰F2-G2-H2有活性,ACE抑制率分別為32.86%、20.75%。然后對這幾個峰分別收集濃縮,用質(zhì)譜分析肽序列。

5、>　　質(zhì)譜分析結(jié)果表明:這4個峰中共含有25個肽,這些肽分別由5~14個氨基酸組成。25個已知序列多肽中有22個多肽的羧基端是脯氨酸或芳香族氨基酸,與預(yù)期相符。
　　最后,用胃腸道消化酶水解峰F1-G5-H1、峰F1-G5-H4、峰F2-G2-H1、峰F2-G2-H2這四個峰。結(jié)果表明,峰F1-G5-H1、峰F1-G5-H4和峰F2-G2-H2經(jīng)過消化酶水解之后,ACE抑制率降低,說明這些序列比較長的肽段,容易被胃腸道消化酶水解成