阿托伐他汀與瑞舒伐他汀治療冠狀動(dòng)脈性疾病對NLRP3炎性體激活的影響.pdf

1、研究目的：
　　確定冠心病患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）在表達(dá)IL-1β和IL-18的同時(shí)，是否表達(dá)NLRP3炎性體。此外，為了評估他汀類藥物對NLRP3炎性體、IL-1β和IL-18水平的影響，我們進(jìn)行了一項(xiàng)前瞻性，隨機(jī)，單盲研究，通過8個(gè)月的隨訪觀察，比較研究阿托伐他汀與瑞舒伐他汀治療對冠心病患者的上述指標(biāo)的影響。
　　研究方法：
　　分為

2、試驗(yàn)組（T組，n=80）和健康對照組（C組，n=49），試驗(yàn)組又分為阿托伐他汀組（A組，n=40）和瑞舒伐他汀組（B組，n=40）兩個(gè)亞組。試驗(yàn)組所有入選者均來自我院心內(nèi)科自2012年6月至2013年12月的住院患者，最終共入選80例符合條件的CHD患者。健康對照組為自2012年3月至2013年10月于我院體檢中心查體的健康人員，共49例，均無心臟病史和家族史，目前無服用他汀類藥物治療的指征，炎性檢查指標(biāo)均在正常范圍。對照組所有受試者性

3、別和年齡均與試驗(yàn)組相匹配。需收集所有受試者的外周靜脈血標(biāo)本。采用隨機(jī)數(shù)字表法將試驗(yàn)組受試者隨機(jī)分配到兩個(gè)治療亞組（阿托伐他汀組和瑞舒伐他汀組）之一。阿托伐他汀組患者給藥方法：口服阿托伐他汀10 mg/天（商品名：立普妥，規(guī)格：10mg/片，Pfizer Ireland Pharmaceuticals，n=40），共8個(gè)月；瑞舒伐他汀組患者給藥方法：口服瑞舒伐他汀5 mg/天（商品名：可定，規(guī)格：5mg/片，Ipr Pharmaceuti

4、cals，Inc.，n=40），共8個(gè)月。健康對照組受試者不予任何處理。所有接受藥物治療的受試者均需每月至少1次門診隨訪，對健康對照組受試者每2周進(jìn)行1次電話隨訪。體外研究中，從試驗(yàn)組患者（接受藥物治療前）的外周血標(biāo)本中分離單個(gè)核細(xì)胞，分別用不同濃度的阿托伐他汀和瑞舒伐他汀處理，觀察給藥前后以及不同濃度給藥的培養(yǎng)上清液的NLRP3炎性體水平和IL-1β和IL-18的水平的變化。通過實(shí)時(shí)測定RT-PCR（反轉(zhuǎn)錄PCR）和流式細(xì)胞儀來定量N

5、LRP3炎性體水平。所有統(tǒng)計(jì)值表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。非配對Student’st檢驗(yàn)用于正態(tài)分布數(shù)據(jù)的分析，非參數(shù)Mann-Whitney檢驗(yàn)用于非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)分析。利用χ2分析和Fisher的精確分析進(jìn)行分類變量的統(tǒng)計(jì)分析。經(jīng)過他汀類藥物8個(gè)月的治療后，阿托伐他汀組和瑞舒伐他汀組兩組間比較則采用雙向ANOVA重復(fù)分析正態(tài)分布變量，采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)分析非正態(tài)分布變量。如果適用，則采用Dunnett事后測試進(jìn)一步分析顯

6、著差異。采用Pearson相關(guān)系數(shù)來研究NLRP3和促炎細(xì)胞因子水平之間的關(guān)系。以P＜0.05表示有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　研究結(jié)果：
　　1.兩組受試者間的年齡、性別、身體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI），血壓（blood pressure，BP）和LDLc水平?jīng)]有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（組間比較，均P＞0.05）。但兩組受試者間的HbA1c（P=0.040）、HDLc（P=0.032）和hsCRP（P=0.0

7、10）則存在顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.阿托伐他汀和瑞舒伐他汀組間的一般臨床特征比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較發(fā)現(xiàn)兩組間的基礎(chǔ)臨床指標(biāo)均無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（組間比較，均P＞0.05）。在為期8個(gè)月的治療隨訪期間，無患者因藥物依從性差或副作用而退出本研究。此外，沒有患者出現(xiàn)嚴(yán)重心血管事件。3.他汀類藥物治療對血脂譜的影響:阿托伐他汀和瑞舒伐他汀
　　組之間的基礎(chǔ)血脂水平無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（組間比較，均P＞0.05）。兩組受試者的所有藥物在8個(gè)月的他汀

8、類藥物治療期間維持不變。結(jié)果表明兩組受試者的LDL-膽固醇和HDL-膽固醇水平均降低，但在冠心病患者的HDL膽固醇水平8個(gè)月治療后無顯著變化。經(jīng)過8個(gè)月的治療后，兩組受試者之間的LDL-膽固醇水平的變化倍數(shù)沒有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（阿托伐他汀組LDL膽固醇的變化倍數(shù)為0.71±0.19，瑞舒伐他汀組為0.69±0.25，組間比較P＞0.05）。4.試驗(yàn)組和對照組兩組間的NLRP3炎性體，IL-1β和IL-18水平比較:與對照組相比，試驗(yàn)組N

9、LRP3炎性體水平（mRNA和蛋白質(zhì)）均顯著較高，分別為比（試驗(yàn)組NLRP3 mRNA為3.32±1.24，對照組為1.87±1.031，P＜0.01；試驗(yàn)組NLRP3 MFI為2.84±1.23，對照組為1.22±0.39，P＜0.01）。試驗(yàn)組和對照組之間的GAPDH平均Ct值無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（試驗(yàn)組為22.13±1.34，對照組為22.39±1.24）。與對照相比，試驗(yàn)組的IL-1β和IL-18的血漿水平較高（試驗(yàn)組IL-1β為

10、0.21±0.05 pg/ml，對照組為0.15±0.04 pg/ml，P＜0.01；試驗(yàn)組IL-18為276.95±110.33pg/l，對照組為218.34±32.55pg/L，P＜0.05）。所有受試者中NLRP3炎癥體的水平（MFI）與IL-1β和IL-18的血漿水平呈弱的正相關(guān)（NLRP3 MFI與IL-1β相比，r=0.35，P＜0.01； NLRP3 MFI與IL-18相比，r=0.36，P＜0.01）。阿托伐他汀和瑞舒伐

11、他汀組之間的NLRP3炎性體、IL-1β和IL-18水平均無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（阿托伐他汀組NLRP3 mRNA為3.15±1.23，瑞舒伐他汀組為3.49±1.31，P＞0.05；阿托伐他汀組NLRP3 MFI為2.71±1.19，瑞舒伐他汀組為3.01±1.45，P＞0.05；阿托伐他汀組IL-1β為0.22±+0.08pg/ml，瑞舒伐他汀組為0.20±0.07pg/ml，P＞0.05；阿托伐他汀組IL-18為262.87±111.

12、30pg/l，瑞舒伐他汀組為287.12±102.76pg/l，P＞0.05）。5.他汀類藥物治療對人THP-1細(xì)胞的影響:在人類THP-1細(xì)胞，與賦形劑處理組相比，經(jīng)阿托伐他汀和瑞舒伐他汀處理組的NLRP3炎癥體水平（MFI）顯著較低。與賦形劑處理組相比，經(jīng)阿托伐他汀和瑞舒伐他汀處理組的上清液的IL-1β和IL-18水平亦顯著較低。THP-1細(xì)胞中，與瑞舒伐他汀處理組相比較，阿托伐他汀處理組的NLRP3炎癥體，IL-1β和IL-18的

13、倍數(shù)變化顯著較高。此外，經(jīng)他汀類藥物處理的細(xì)胞的上述指標(biāo)水平的倍數(shù)變化呈劑量依賴性，且阿托伐他汀的最大抑制作用在0.5μM，瑞舒伐他汀為10μM）。6.他汀類藥物對試驗(yàn)組患者NLRP3炎癥體，IL-1β和IL-18水平的影響經(jīng)他汀類藥物治療8個(gè)月后，阿托伐他汀組的NLRP3炎癥體水平（mRNA和MFI）顯著下降（治療前后比較，P＜0.05），但瑞舒伐他汀組的NLRP3炎癥體水平則無顯著變化(治療前后比較，P＞0.05)。經(jīng)治療8個(gè)月后，

14、阿托伐他汀組血漿IL-1β和IL-18水平均顯著下降（治療前后比較，均P＜0.05），而瑞舒伐他汀組中血漿IL-1β和IL-18水平則無顯著變化(治療前后比較，均P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　本研究表明，活化NLRP3炎性體可能經(jīng)由IL-1β和IL-18成熟而對慢性炎癥反應(yīng)起作用，從而在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展中起重要作用。他汀類藥物，特別是阿托伐他汀，具有通過抑制冠心病患者NLRP3炎性體而下調(diào)IL-1β和IL-18成熟