牛乳產(chǎn)蛋白酶菌分離鑒定及產(chǎn)酶條件的研究.pdf

1、試驗(yàn)從呼市地區(qū)鮮牛乳中分離得到65株蛋白酶生產(chǎn)菌，從中篩選出產(chǎn)蛋白酶較高的3株菌進(jìn)行生理生化鑒定，同時(shí)對(duì)其產(chǎn)酶條件及發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化。最終選出高產(chǎn)蛋白酶且具穩(wěn)定性的菌株進(jìn)行分子鑒定、酶學(xué)性質(zhì)研究及通過(guò)誘變處理進(jìn)一步提高產(chǎn)蛋白酶能力。 產(chǎn)蛋白酶較高較穩(wěn)定的三株菌Bs4、Bs15、Bs2917通過(guò)生理生化試驗(yàn)鑒定為枯草芽孢桿菌。對(duì)產(chǎn)蛋白酶最高且穩(wěn)定的Bs4菌株進(jìn)行形態(tài)特征觀察、生理生化試驗(yàn)和16S rDNA序列分析結(jié)果表明為枯草芽孢

2、桿菌。其中Bs4菌株的最佳培養(yǎng)條件：溫度為37℃、pH6.5、培養(yǎng)時(shí)間為36h、接種量為3％，酶活力可達(dá)到1888.73L/mL： Bs15菌株的最佳培養(yǎng)條件：溫度為32℃、pH7.5、培養(yǎng)時(shí)間為36h、接種量為3％，酶活力可達(dá)到712.18L/mL； Bs2917菌株的最佳培養(yǎng)條件：溫度為32℃、pH7.O、培養(yǎng)時(shí)間為48h、接種量為3％，酶活力可達(dá)到367.57U/mL。 通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)可知Bs4菌株最優(yōu)培養(yǎng)基配方

3、為：玉米粉33.4g/L，麩皮33.4g/L，豆餅粉30.8g/L，（NH4）2HPO4/KH2PO412.09g/L，經(jīng)37℃，36h培養(yǎng)測(cè)得酶活力為2129.31L/mL； Bs15菌株最優(yōu)培養(yǎng)基配方為：玉米粉29.95g/L，麩皮29.95g/L，豆餅粉31.8g/L，（NH4）2HPO4/NaH2PO45.9g/L，經(jīng)32℃，36h培養(yǎng)后實(shí)際測(cè)得菌株酶活力為1390.79U/mL。 對(duì)菌株Bs4進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)研究發(fā)現(xiàn)酶最適

4、作用溫度為57℃，最適pH為7.0.該酶具有一定的熱穩(wěn)定性，40℃保溫30min，活力幾乎沒有損失，50℃保溫60min仍保留40％的酶活力，超過(guò)50℃穩(wěn)定性下降，70℃，20min酶活力全部喪失：Mg2+、ca2+、K+對(duì)酶有一定的激活作用和穩(wěn)定作用，Zn2、Fe3+對(duì)酶有一定的抑制作用。 對(duì)菌株Bs4進(jìn)行了紫外、微波、亞硝酸鹽等單因子誘變處理，得到突變菌株UB-12產(chǎn)酶活力為3014 U/mL，其出發(fā)菌產(chǎn)酶活力提高了40％左