NRK-52E細胞成腎小管的實驗研究.pdf

1、[研究背景及目的]
　　 慢性腎臟疾病日益成為全球性公共健康問題。我國終末期腎病的發(fā)病率也呈上升趨勢。血液透析或腹膜透析是目前最常用的治療方法，但它們不能替代腎臟全部功能，腎臟移植仍然是最佳選擇。但因目前供體器官來源嚴重短缺，并且存在感染、移植腎排斥、腫瘤高發(fā)等并發(fā)癥，極大的限制了移植醫(yī)學的發(fā)展和終末期腎病患者的治療。因此，針對終末期腎病的治療急需尋求新的治療策略以改善傳統(tǒng)的治療方法。
　　 組織工程是近年來興起的一門新

2、學科，科研人員已經(jīng)在骨骼、軟骨、皮膚、神經(jīng)、血管、乳腺等多種組織、器官體外再造研究方面取得了進展。但是由于腎臟組織結(jié)構(gòu)和功能復雜，目前尚未找到理想的腎臟再造種子細胞，至今尚未成功構(gòu)建出可供臨床應用的腎臟組織。
　　 體外再造腎小管組織是腎臟再造的基礎。本實驗根據(jù)組織工程學的原理，以大鼠腎小管上皮細胞(NRK-52E)為種子細胞，分別以Ⅰ型膠原和Matrigel作為細胞生長的支架材料，觀察腎小管上皮細胞在不同支架材料中的增殖、分化

3、及成小管的能力，并進一步行體內(nèi)的成小管實驗，探討NRK-52E細胞體內(nèi)成小管的能力，為進一步的腎臟組織工程提供實驗依據(jù)。
　　 [材料與方法]
　　 選取生長狀態(tài)良好的NRK-52E細胞分別與Ⅰ型膠原或Matrigel混和后加入24孔板中，置于5％CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在倒置顯微鏡下連續(xù)觀察NRK-52E細胞在Ⅰ型膠原或Matrigel中生長聚集和形成管腔的情況。根據(jù)體外實驗的結(jié)果，將NRK-52E細胞和Matri

4、gel混合后注射入SD大鼠背部皮下，移植后2、4、6、8、10、12、14d觀察大體形態(tài)，HE染色和免疫組化染色觀察組織結(jié)構(gòu)。將Matrigel、生理鹽水分別注射入SD大鼠背部皮下作為對照一組和對照二組。
　　 [結(jié)果]
　　 在體外，NRK-52E細胞在Ⅰ型膠原和Matrigel這兩種細胞外基質(zhì)中都能增生聚集，在Ⅰ型膠原中形成少量的多層細胞構(gòu)成的小管樣結(jié)構(gòu)，在Matrigel中形成單層細胞構(gòu)成的小管樣結(jié)構(gòu)。NRK-52

5、E細胞以Matrigel作為支架材料移植入SD大鼠背部皮下8天后能形成新生組織。通過對組織切片HE染色，免疫組化染色觀察，新生組織中有單層細胞構(gòu)成的小管樣結(jié)構(gòu)形成，免疫組化染色證實形成小管樣結(jié)構(gòu)的細胞為腎小管上皮細胞。對照組在注射后8天甚至到14天均未見新生小管組織生成。
　　 [結(jié)論]
　　 無論體外還是體內(nèi)實驗，NRK-52E細胞都可以作為種子細胞來構(gòu)建組織工程化的腎小管結(jié)構(gòu)，Matrigel可以增強NRK-52E細