Intermedin對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的NRK-52E細胞纖維化的影響及機制研究.pdf

1、目的：
　　觀察intermedin（IMD）對血管緊張素II（Ang II）誘導(dǎo)的大鼠近端腎小管上皮細胞系NRK-52E纖維化的影響，并探討其機制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)的 NRK-52E細胞，隨機分為4組：正常對照組、Ang II干預(yù)組（10-6mol/L）、轉(zhuǎn)染IMD質(zhì)粒+Ang II干預(yù)組、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒+Ang II干預(yù)組。采用Fugene HD轉(zhuǎn)染試劑，將pIRES2-EGFP空質(zhì)粒和pIRES2-IMD真

2、核表達質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至NRK-52E細胞，應(yīng)用流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染成功48 h后用Ang II（10-6mol/L）干預(yù)24 h。用real-time RT-PCR檢測各組細胞中I型膠原（Col I）的表達；Western印跡法檢測Col I、E-鈣黏蛋白（E-cadherin）的表達；ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）的濃度。
　　結(jié)果：
　　通過熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染成

3、功后細胞的EGFP表達，流式細胞術(shù)檢測細胞轉(zhuǎn)染效率為（35.73±7.28）％。與正常對照組相比，Ang II組Col I的表達顯著上調(diào)（mRNA水平t=4.835，P=0.008；蛋白質(zhì)水平P<0.001），E-cadherin的表達顯著下降（t=4.284， P=0.013）；轉(zhuǎn)染IMD質(zhì)粒后Col I的表達較Ang II組明顯下降（mRNA水平t=3.032， P=0.039；蛋白質(zhì)水平P<0.001），E-cadherin的表達

4、明顯上調(diào)（t=6.054，P=0.004）；而轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒后Col I、E-cadherin的表達與Ang II無明顯差別（Col I mRNA水平t=0.951，P=0.395；蛋白質(zhì)水平t=1.208，P=0.294；E-cadherin蛋白質(zhì)水平t=1.613，P=0.182）。與正常對照組相比，Ang II組細胞上清液eNOS、cGMP的濃度顯著增加（eNOS t=20.718，P<0.001；cGMP t=8.324，P=0.0

5、01）；與Ang II組相比，IMD質(zhì)粒+Ang II組的濃度進一步增加（eNOS t=10.682，P<0.001；cGMP t=18.974，P<0.001）；而轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組+Ang II組eNOS及cGMP的濃度與Ang II組無明顯差別（eNOS t=2.039，P=0.111；cGMP t=1.469，P=0.216）。
　　結(jié)論：
　　IMD對Ang II誘導(dǎo)的腎小管上皮細胞纖維化有抑制作用，可能通過eNOS-c