致奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌特異性卵黃抗體的制備及活性研究.pdf

1、奶牛乳腺炎是奶牛養(yǎng)殖業(yè)中最常見的一種疾病，具有發(fā)病率高、流行快等特點(diǎn)，造成奶牛業(yè)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。常用的抗生素預(yù)防和治療法，會(huì)引起動(dòng)物體內(nèi)甚至牛奶中藥物殘留和細(xì)菌耐藥性的增強(qiáng)，間接危害人類健康。因此，尋找一種安全、高效的抗生素替代品成為一個(gè)亟待解決的問題。 特異性卵黃免疫球蛋白(Egg yolk immunoglobulin，IgY)可治療由細(xì)菌或病毒引起的疾病，具有安全無殘留、不產(chǎn)生抗藥性、服用簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，是一種具有廣闊應(yīng)用前景

2、的抗生素替代品。 本研究以引起奶牛乳腺炎的主要致病菌——金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)為抗原，免疫蛋雞后獲得特異性IgY；經(jīng)分離、純化后，測(cè)定其純度、抗體效價(jià)以及特異性抗體的含量，用凝集試驗(yàn)，免疫電鏡等方法對(duì)特異性IgY在體外對(duì)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)的抑制作用進(jìn)行了研究；考察了特異性IgY對(duì)奶牛多形核白細(xì)胞(PMN)和單核巨噬細(xì)胞(Mφ)吞噬金黃色葡萄球菌的影響。 結(jié)果表明，水稀

3、釋-兩部鹽析-凝膠過濾純化的方法提取IgY純度可達(dá)94.52％；間接酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)表明抗體效價(jià)在高水平上長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)，最高可達(dá)1：25600，高效價(jià)維持30余天；卵黃中總IgY的含量為9.56 mg/mL，與蛋雞是否免疫無明顯關(guān)系，而特異性IgY的含量因蛋雞免疫而顯著增高，從免疫初始的0.4 mg/mL提高到1.57 mg/mL。體外抑菌研究發(fā)現(xiàn)，非特異性IgY對(duì)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)速率無顯著影響，而5 mg/mL特異性Ig

4、Y能夠顯著抑制其生長(zhǎng)(P<0.05)，濃度達(dá)到10mg/mL時(shí)，細(xì)菌生長(zhǎng)情況與青霉素陽(yáng)性對(duì)照組(100μg/mL)無顯著差異(P>0.05)。免疫電鏡表明特異性IgY與金黃色葡萄球菌結(jié)合，細(xì)菌邊緣消失，結(jié)構(gòu)發(fā)生顯著變化。流式細(xì)胞檢測(cè)表明濃度為0.05 mg/mL的特異性IgY，能夠顯著促進(jìn)奶牛外周血及乳PMN和Me對(duì)S.aureus的吞噬作用(P<0.05)，而當(dāng)濃度過大時(shí)，則對(duì)其吞噬發(fā)生抑制。 綜上，本研究成功制備出高純度、特