桑樹韌皮部汁液mul-miR482和mul-miR58的生物學功能研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩75頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、植物在長期的進化過程中形成了特有的信息交流網(wǎng)絡,韌皮部作為信號分子長距離傳遞的主要通道,具有感應環(huán)境信號、傳導系統(tǒng)信號的功能。韌皮部汁液中具有豐富的miRNA,汁液中的miRNAs作為一種重要的調控因子,在調控基因表達方面有非常廣泛的生物學功能。本研究根據(jù)已有的桑樹轉錄組信息,克隆得到桑樹韌皮部汁液mul-miR482和mul-miR58的基因,采用定量PCR技術分析了其組織表達特性,并利用轉基因技術研究了mul-miR482和mul-

2、miR58的生物學功能;利用Tail-PCR技術擴增得到mul-miR482基因的啟動子,通過GUS組織化學染色分析了其表達活性;采用擬南芥微嫁接技術對mul-miR482的可運輸性進行了分析。研究結果為揭示桑樹mul-miR482和mul-miR58的生物功能以及韌皮部介導的miRNA長距離傳導的分子調控機制奠定了基礎,同時為桑樹功能基因組學研究提供了參考。
  本文的主要研究結果如下:
  (1)桑樹韌皮部汁液mul-m

3、iR482的生物學功能分析
  根據(jù)已有的桑樹轉錄組序列信息,利用PCR技術克隆得到桑樹mul-miR482的基因,命名為MulMIR482,構建了其植物表達載體,并成功轉化了擬南芥。通過Northern-blot和熒光定量PCR分析發(fā)現(xiàn)MulMIR482基因能在轉基因擬南芥植株中高效表達并加工形成成熟體。Mul-miR482在擬南芥中表達使植株表型發(fā)生明顯變化,降低了轉基因植株的耐鹽能力,提高了植株對丁香假單胞桿菌番茄致病變種(

4、Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000,PstDC3000)的敏感性。因此,mul-miR482對植物的生長發(fā)育具有一定的調節(jié)作用,并在植物對鹽分脅迫的響應和抗病反應過程中起著負調控作用。
  (2)桑樹韌皮部汁液中mul-miR482的組織表達特性分析
  利用Tail-PCR方法克隆得到MulMIR482的側翼序列共1937bp,分析發(fā)現(xiàn)該序列中包含23個順式作用元件,其中包含CAAT

5、-BOX和TATA-BOX啟動子核心元件及其它多種轉錄因子結合位點和基因轉錄調控元件。構建該啟動子啟動GUS基因的植物表達載體,轉化擬南芥,對轉基因植株進行GUS組織化學分析,結果顯示pmiR482-GUS在植株的莖和花中表達量高,在根中表達量很低,而在葉片和果莢中則不表達,表明MulMIR482基因表達有組織特異性;利用熒光定量PCR對mul-miR482成熟體的組織表達特性分析發(fā)現(xiàn),mul-miR482成熟體在桑樹根、果實、樹皮和葉

6、片中均有表達,表明mul-miR482成熟體的積累沒有組織特異性,但其在不同組織和器官中的豐度具有明顯差異,在根組織中的豐度最高,而在葉片中的豐度最低。
  (3)桑樹韌皮部汁液mul-miR482的運輸性分析
  分別以轉基因幼苗和野生型幼苗做砧木(或接穗)和接穗(或砧木)進行嫁接,利用熒光定量PCR分析砧木與接穗部分中mul-miR482表達豐度。分析結果表明,mul-miR482在植物體內可以上下雙向運輸,但由上往下運

7、輸量大于由下往上的運輸量或者主要是由上往下進行運輸。
  (4)桑樹韌皮部汁液mul-miR58的生物學功能分析
  利用PCR技術克隆得到桑樹mul-miR58的基因,命名為MulMIR58,熒光定量PCR分析發(fā)現(xiàn)mul-miR58在桑樹根、果實、樹皮均有很高的表達量,而在葉片中的表達量極低。將MulMIR58轉入擬南芥獲得了轉基因植株,通過Northem-blot和熒光定量PCR分析發(fā)現(xiàn)MulMIR58基因能在轉基因擬南

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論