SIRT1-LXR-NF-κB可能是促使動脈粥樣硬化斑塊消退的重要信號通路.pdf

1、目的：建立U937泡沫細胞模型，研究SIRT1與泡沫細胞移出動脈粥樣硬化斑塊相關調控通路LXR-CCR7和促炎癥信號NF-κB的相關性。
　　方法：體外培養(yǎng)人單核細胞株U937細胞，通過軟脂酸鈉和氧化型低密度脂蛋白構建泡沫細胞模型。實驗分為空白對照組，轉染試劑組，siRNA干擾組，高脂組、高脂+SRT1720組、高脂+SRT1720+干擾組。油紅O對細胞進行脂肪染色，檢測細胞內脂肪積累情況。以160nMPMA誘導 U937單核細胞

2、，24h后細胞呈貼壁生長以后，進行 SIRT1 siRNA干擾操作，干擾48h后，進行 Western blot檢驗。然后在泡沫細胞模型中用 SIRT1激動劑 SRT1720使SIRT1高表達，高表達后再用 RNA干擾抑制SIRT1的表達，用Western blot法觀察SIRT1、LXR及其下游靶分子CCR7和ABCA1的表達變化，以及炎癥因子NF-κB和其下游靶分子TNF-α、IL-6的表達變化。
　　結果：觀察細胞內脂肪積累

3、的實驗結果顯示,高脂高膽固醇組誘導下的細胞內脂肪積累顯著高于高糖對照組。Western blot實驗結果表明siRNA對SIRT1蛋白表達有顯著抑制作用，SIRT1蛋白表達顯著下降。在泡沫細胞模型中，SRT1720使SIRT1蛋白表達水平升高，LXR和其靶分子CCR7蛋白水平無顯著變化，而NF-κB以及其靶分子TNFα蛋白表達水平顯著下降。在加入SRT1720的基礎上再用RNA干擾抑制SIRT1的表達，結果表明RNA干擾使SIRT1的表

4、達水平顯著下降，LXR和其靶分子CCR7表達也隨之下降；與此同時，NF-κB及其下游靶基因TNF-α表達水平顯著升高。
　　結論：在高脂加氧化型低密度脂蛋白培養(yǎng)條件下,人單核細胞株內積累了大量的脂肪。我們的實驗表明了在泡沫細胞中SIRT1是LXR-CCR7以及NF-κB信號通路的上游，并且有可能通過上調LXR-CCR7信號通路，抑制NF-κB炎癥信號來參與調節(jié)泡沫細胞從動脈粥樣硬化斑塊中移出。為探究長壽基因SIRT1在動脈粥樣硬化