肝硬變組織中變異肝細(xì)胞結(jié)節(jié)的檢出及其遺傳學(xué)改變.pdf

1、目的:
　　 肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是人類(lèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明。對(duì)肝移植時(shí)取出的病肝進(jìn)行的觀察顯示,變異肝細(xì)胞病灶(focus of altered hepatocytes,FAH)是最早期、最常見(jiàn)的一類(lèi)腫瘤前期病變,它們可能通過(guò)形成變異肝細(xì)胞結(jié)節(jié)(nodule of altered hepatocytes,NAH)和/或小細(xì)胞性改變(small-cell c

2、hange,SCC)進(jìn)展為HCC。本研究觀察了50例HCC切除標(biāo)本,從癌周肝組織中檢出了NAH和SCC改變,并對(duì)經(jīng)顯微切割分離的50個(gè)NAH病變進(jìn)行了多個(gè)位點(diǎn)的雜合性丟失(loss of heterozygosity,LOH)的分析,以期能證實(shí)它們與HCC的關(guān)系及其相關(guān)的遺傳學(xué)改變。
　　 方法:
　　 選擇50例HCC和1例不典型腺瘤樣增生(atypical adenomatoid hyperplasia,AAH)切除

3、標(biāo)本,對(duì)腫瘤周?chē)谓M織進(jìn)行組織學(xué)和免疫組織化學(xué)觀察,按已經(jīng)建立的標(biāo)準(zhǔn)檢出不同類(lèi)型的FAH和NAH,并對(duì)是否伴有SCC及其級(jí)別進(jìn)行評(píng)判。應(yīng)用61個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)分析檢測(cè)22例HCC組織的LOH。選出代表性位點(diǎn)28個(gè),對(duì)通過(guò)顯微切割分離的50個(gè)NAH和5個(gè)普通再生結(jié)節(jié)(regenerative nodule,RN)進(jìn)行LOH分析。同一個(gè)位點(diǎn)LOH發(fā)生率達(dá)到20％者被認(rèn)為是頻繁發(fā)生(頻發(fā))事件,達(dá)到30％者被認(rèn)為是高度頻繁(高頻)發(fā)生,同一類(lèi)病變

4、發(fā)生LOH的平均數(shù)被稱(chēng)為等位基因失衡指數(shù)(allelic imbalance index,AII)。并挑選可能與LOH發(fā)生相關(guān)的5種蛋白標(biāo)志物進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè),以初步了解其功能改變。
　　 結(jié)果:
　　 共觀察了50例HCC切除標(biāo)本,癌周肝組織均呈慢性肝炎表現(xiàn),其中38例(76％)伴有肝硬變。這些標(biāo)本中,均檢出FAH和NAH。在33例(66％)標(biāo)本中查見(jiàn)SCC,均為低級(jí)別SCC。硬變癌周組織中SCC病變檢出率為81.

5、6％(31/38),高于不伴有肝硬變者(2/12,16.7％；P<0.05)。
　　 對(duì)1例AAH的觀察顯示,此病變由多個(gè)NAH構(gòu)成,多數(shù)伴有高級(jí)別的SCC改變。
　　 挑選7例EdmondsonⅠ級(jí)、11例Ⅱ級(jí)和4例Ⅲ級(jí)HCC標(biāo)本進(jìn)行LOH分析。結(jié)果顯示,Ⅰ級(jí)HCC標(biāo)本的LOH檢出率為86％(6/7),Ⅱ級(jí)HCC標(biāo)本的LOH檢出率為82％(9/11),而Ⅲ級(jí)標(biāo)本均顯示出等位基因失衡。三組標(biāo)本的AII分別為6.3(0-1

6、0個(gè))、3.3(0-12個(gè))和8.5(3-16個(gè))。
　　 檢測(cè)的61個(gè)位點(diǎn)中,43個(gè)(70％)在至少1例標(biāo)本中發(fā)生了LOH。其中D16S3029位點(diǎn)的LOH頻率最高,為43％(6/14),其它高頻缺失的位點(diǎn)包括D11S2008(42％,8/19)、D17S796(40％,8/20)、D11S1301(37％,7/19)、D8S261(36％,4/11)、D6S1008(31％,4/13)和D17S1840(30％,6/20),

7、分別位于6q、8p、11p、16q及17p。
　　 根據(jù)上述對(duì)HCC的觀察,選擇28個(gè)代表性位點(diǎn),對(duì)NAH(n=50)以及RN(n=5)進(jìn)行了LOH分析。17個(gè)不伴有SCC的NAH標(biāo)本中,14個(gè)(82％)至少在一個(gè)位點(diǎn)上顯示出等位基因失衡,AII為2.3(0-6個(gè))；33個(gè)伴有SCC的NAH中,28個(gè)(85％)顯示出等位基因失衡,AII為3.2(0-8個(gè))；22例HCC標(biāo)本中,28個(gè)位點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果顯示,19例(86％)顯示出LO

8、H,AII為5.4(0-12個(gè)),高于NAH以及伴有SCC的NAH(P<0.05)；檢測(cè)的5例RN均未顯示出LOH。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步證實(shí),與RN不同,大多數(shù)NAH病變已經(jīng)屬于克隆性增生,不管是否伴有SCC。
　　 我們的結(jié)果還顯示,不伴有SCC的NAH和伴有SCC的NAH改變攜帶有特征性的遺傳學(xué)改變,前者中,LOH頻發(fā)位點(diǎn)包括D8S1754(4/16,25％)、D11S1301(6/13,46.2％)和D17S796(4/17,2

9、3.5％),而后一組病變的LOH頻發(fā)位點(diǎn)包括D6S1008(7/32,21.9％)、D11S1301(9/29,31％)、D11S2008(7/33,21.2％)和D17S695(6/29,20.7％)。與HCC病變的LOH發(fā)生譜相對(duì)照,顯示D11S1301、D17S796等位點(diǎn)的LOH從SCC發(fā)生之前就存在,提示可能與HCC發(fā)生的早期事件相關(guān)；D17S695等位點(diǎn)見(jiàn)于伴有SCC的NAH病變和HCC,提示可能與SCC的發(fā)生有關(guān)；D17S

10、1840、D17S926等僅見(jiàn)于HCC,提示可能與肝細(xì)胞腫瘤惡性轉(zhuǎn)化階段有關(guān)系。
　　 按照以上LOH結(jié)果,我們選出可能與LOH相關(guān)的5種蛋白進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)。50例HCC病例中,隨著病理學(xué)分級(jí)的升高,p53蛋白表達(dá)水平有增加的趨勢(shì)；XA目的表達(dá)在FAH/NAH與伴有SCC的FAH/NAH和肝細(xì)胞癌間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；WWOX清晰地勾勒出癌旁組織中的FAH/NAH,WWOX在FAH/NAH和HCC中的表達(dá)較正常肝組織顯

11、著降低,提示我們WWOX可能參與HCC形成的早期過(guò)程；而β-catenin和E-cadherin在三組間的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論:
　　 通過(guò)對(duì)手術(shù)切除標(biāo)本的觀察,證實(shí)了NAH是廣泛存在的,肝硬變組織中SCC的檢出率明顯高于不伴肝硬變的組織。
　　 不管是否伴有SCC,多數(shù)NAH均可檢測(cè)到LOH,表明它們都是克隆性增生,屬于微小肝細(xì)胞腺瘤,相當(dāng)于肝實(shí)質(zhì)上皮內(nèi)腫瘤(hepatic intraepitheli

12、al neoplasia,HIN)。
　　 NAH及伴有SCC的NAH中發(fā)生的LOH改變都見(jiàn)于HCC標(biāo)本,證實(shí)這兩種病變都是HCC前期改變,代表了HCC發(fā)生的不同階段。它們之間在LOH發(fā)生譜上的不同提示NAH的發(fā)生、進(jìn)展(SCC發(fā)生)以及充分惡性表型的出現(xiàn)可能涉及不同的遺傳學(xué)改變。
　　 WWOX在伴/不伴有SCC的NAH和HCC中的表達(dá)較結(jié)構(gòu)正常肝組織明顯降低,提示其可能參與HCC形成的早期過(guò)程,可能與16q的LOH相