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文檔簡(jiǎn)介
1、背景:肝細(xì)胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是常見(jiàn)的惡性腫瘤,尤其在我國(guó)高發(fā),其早期診斷及分子靶向治療是主要的研究方向和熱點(diǎn)。表觀遺傳學(xué)是一門(mén)研究基因表達(dá)的學(xué)科,最近的研究表明表觀遺傳學(xué)的異常改變不僅可以作為腫瘤早期診斷和預(yù)后的標(biāo)志物,還可用于腫瘤的治療。因此研究肝癌的表觀遺傳學(xué)改變及機(jī)制,對(duì)肝癌的早期診斷、預(yù)后和治療具有重要的意義。
目的:分析肝細(xì)胞癌中Sox17基因的表觀遺傳學(xué)改變,探討S
2、ox17甲基化作為肝癌診斷的可能性;同時(shí)在肝細(xì)胞癌中研究Sox17基因在Wnt通路中的作用,明確其與肝細(xì)胞癌發(fā)生的關(guān)系,為肝癌的分子靶向治療提供依據(jù)。
材料與方法:本研究采用的6種肝癌細(xì)胞株取自解放軍總醫(yī)院消化科實(shí)驗(yàn)室,分別為HepG2、SMMC7721、SNU449、L0.2、SK-Hep1和PLC—PRF-5,經(jīng)5-氮雜-2’-脫氧胞嘧啶(5-aza—dc)處理前后的肝癌細(xì)胞株中Sox17基因的表達(dá)應(yīng)用RT—PCR技術(shù)
3、檢測(cè);同時(shí)肝癌細(xì)胞株Soxl7啟動(dòng)子區(qū)甲基化的情況應(yīng)用甲基化特異性PCR(methylation specific PCR,MSP)技術(shù)檢測(cè)。62例人原發(fā)性肝細(xì)胞癌手術(shù)切除癌標(biāo)本取自河南省腫瘤醫(yī)院,癌組織中Sox17基因甲基化的情況應(yīng)用MSP技術(shù)檢測(cè)。4例人原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織及配對(duì)的4例非癌肝組織標(biāo)本取自河南省腫瘤醫(yī)院、并經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí),該組織中wnt信號(hào)通路β—catenin基因的表達(dá)應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)。
結(jié)果:
4、應(yīng)用半定量RT—PCR技術(shù)檢測(cè)6種肝癌細(xì)胞株發(fā)現(xiàn)HepG2、SMMC7721、SNU449和L0.2表達(dá)Sox17 mRNA;而SK—Hep1和PLC—PRF-5無(wú)Sox17 mRNA表達(dá)。MSP結(jié)果顯示SK—Hep1存在甲基化改變;而PLC—PRF-5和L0.2存在部分甲基化改變。HepG2、SMMC7721和SNU449這3種Sox17 mRNA弱表達(dá)的肝癌細(xì)胞株經(jīng)去甲基化藥物5-aza—dc處理后,Sox17基因的表達(dá)明顯增強(qiáng);并
5、且MSP證實(shí)此3種肝癌細(xì)胞株均發(fā)生Sox17基因甲基化,表明啟動(dòng)子區(qū)甲基化調(diào)控Sox17基因表達(dá)。在62例人原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中51例(82.26%)發(fā)生甲基化。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法分析4例人原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織的β—catenin發(fā)現(xiàn),Sox17甲基化的肝細(xì)胞癌標(biāo)本β—catenin在胞核中表達(dá)明顯增加;而Sox17非甲基化的非癌肝組織中β—catenin僅在胞膜和胞漿中表達(dá)。
結(jié)論:本研究中的6種肝癌細(xì)胞株Sox17基因
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