慢性粒細(xì)胞白血病遺傳學(xué)改變分析.pdf

1、背景和目的
　　 慢性粒細(xì)胞白血病(CML)是一種起源于多潛能造血干細(xì)胞異常的惡性克隆性疾病，90％～95％CML患者具有費(fèi)城染色體(Philadelphia，Ph)，其分子基礎(chǔ)是9號(hào)染色體上的c-a61基因易位到22號(hào)染色體上的bcr基因上形成新的基因嵌合bcr/ab1融合基因，即t(9；22)(q34：q11)。該基因表達(dá)p210 bcr/ab1融合蛋白有持續(xù)增強(qiáng)的酪氨酸激酶活性，機(jī)體對(duì)其失去了調(diào)控，它自發(fā)地通過(guò)多種途徑進(jìn)行

2、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，干擾了正常的細(xì)胞程序，如增殖、粘附和凋亡等，最終導(dǎo)致細(xì)胞惡變。早在1960年就在CML患者中發(fā)現(xiàn)了Ph染色體，并證明是由9號(hào)染色體易位至22號(hào)染色體而形成的。目前認(rèn)為，CML是一種造血干細(xì)胞的高度異質(zhì)性疾病，Ph染色體是其最特異的染色體異常，由此而產(chǎn)生的BCR/ABL融合基因重排是CML較為特征性的分子標(biāo)志，也是客觀準(zhǔn)確地診斷CML的主要依據(jù)。尤其對(duì)于初診時(shí)即進(jìn)入急變期的患者，Ph染色體的發(fā)現(xiàn)有助于CML診治。資料顯示，90％

3、～95％的CML患者存在Ph染色體，CML除了典型的Ph染色體外，少數(shù)患者還存在其他復(fù)雜易位。約有5％的CML可出現(xiàn)變異的Ph染色體或復(fù)雜的染色體核型變化，尤其是在加速和急變期。未接受特殊治療的CML者一般經(jīng)歷2～3年的慢性期，經(jīng)過(guò)治療后部分患者可長(zhǎng)期生存。在轉(zhuǎn)化過(guò)程中，患者遺傳學(xué)檢查可發(fā)現(xiàn)附加染色體異常，這些異常常出現(xiàn)在臨床轉(zhuǎn)變之前，成為惡性克隆進(jìn)展的主要機(jī)制之一。由于目前所有白血病的融合基因尚未完全確定，進(jìn)行骨髓染色體核型分析是十分

4、有必要的。
　　 染色體核型分析對(duì)CML的診斷、治療、病情監(jiān)測(cè)及預(yù)后判斷具有重要意義。常規(guī)染色體核型分析近年已有一些研究和報(bào)道，但在常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)(CC)方法檢測(cè)基礎(chǔ)上運(yùn)用分子生物學(xué)方法一熒光原位雜交(FISH)技術(shù)進(jìn)行染色體核型分析則少見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究應(yīng)用此法對(duì)194例CML患者染色體核型進(jìn)行分析，其中5例應(yīng)用FISH技術(shù)檢出bcr/ab1融合基因，探討細(xì)胞遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)的有關(guān)特點(diǎn)及在白血病診治、預(yù)后判斷中的意義。

5、>　　 1.材料和方法
　　 1.1研究對(duì)象194例為2004年1月～2008年9月鄭州大學(xué)一附院就診的CML患者。男性128例，女性66例(男女之比約為2：1)，年齡7～75歲，平均年齡38歲。其中14歲以下9例，14～50歲155例(占總例數(shù)的80.1％)，50歲以上30例。CML的診斷和分期參照張之南《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》。臨床分期：慢性期(CP)146例，加速期(AP)及急變期(BC)48例。
　　 1.2方

6、法
　　 1.2.1常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)(cc)法：染色體分析取患者骨髓細(xì)胞，采用24h短期培養(yǎng)法制備骨髓染色體，應(yīng)用G顯帶技術(shù)，平均每例計(jì)數(shù)20個(gè)核型，分析3-5個(gè)核型，按《人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制(ISCN)》(1995年)進(jìn)行核型分析。1.2.2熒光原位雜交(FISH)技術(shù)是在常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)方法檢測(cè)基礎(chǔ)上運(yùn)用分子生物學(xué)方法-熒光原位雜交(FISH)技術(shù)，應(yīng)用bcr/ab1雙色雙融合探針對(duì)骨髓間期細(xì)胞進(jìn)行熒光原位雜交，在熒光顯微

7、鏡下用計(jì)算機(jī)成像系統(tǒng)分析中期分裂相200個(gè)，至少7％以上的細(xì)胞出現(xiàn)異常的雜交信號(hào)才能被判斷為陽(yáng)性結(jié)果。
　　 1.2.3統(tǒng)計(jì)方法采用X2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 結(jié)果：
　　 1.Ph染色體的發(fā)生頻率和類型194例CML患者中，Ph染色體陽(yáng)性(Ph+)166例(占85.57％)，其中慢性期133例，加速期及急變期33例。152/166例(91.56％)僅具有典型的染色體易位，即t(9：22)(q34：q11)。1

8、4/166例(占8.4％)存在變異易位，包括8例復(fù)雜易位，6例簡(jiǎn)單易位。Ph染色體陰性(Ph-)28例，其中慢性期13例，加速期及急變期15例。
　　 2.Ph染色體以外的其他染色體異常的頻率和類型28例Ph-患者中，5例應(yīng)用FISH技術(shù)檢出bcr/ab1融合基因；23例多次隨訪后經(jīng)RT-PCR證實(shí)有bcr/ab1融合基因存在，其中有13例發(fā)現(xiàn)其他染色體核型異常，主要核型異常包括-21(5例)，-7-17(1例)，-17+22(

9、3例)，+8(4例)。166例Ph+CML患者中，28/166例(16.86％)伴有額外染色體異常。其中3例系慢性期患者，其主要類型為雙Ph++817q+;25例系急變期患者，占急變期患者總數(shù)的75.6％，其額外染色體異常包括-22(6例)，-21(4例)，-11(3例)，+8(2例)，-10(2例)，+14(1例)，+20(1例)，9q+(1例)，21+(1例)，19p+(1例)，17q+(1例)，15q+(1例)，17q(1例)。2

10、0例同時(shí)存在2個(gè)異常克隆，其中19例為急變期，1例為慢性期。6例有3個(gè)異?？寺?，其中1例為慢性期，其余均為急變期。2例有4個(gè)異常克隆均為急變期。
　　 3.5例骨髓細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)后未發(fā)現(xiàn)有絲分裂期細(xì)胞的慢性期患者，經(jīng)FISH技術(shù)采用bcr/ab1雙色雙融合探針證實(shí)均出現(xiàn)ph+染色體，使其與166例CML慢性期Ph+總陽(yáng)性率變?yōu)?7.6％。
　　 結(jié)論：
　　 1.CML患者存在Ph染色體核型，少數(shù)患者在加速及急變期出